[发明专利]一种细胞冷冻、快速复苏与培养的方法

摘要

本发明公开一种细胞冷冻、快速复苏与培养方法。所述方法包括以下步骤：使用明胶包被多孔板；将培养基加入多孔板中，‑80℃冷冻1天以上备用；消化收集细胞，向所述细胞中加入冻存液，4℃冷藏0.5小时；取出冷冻后的多孔板，向所述多孔板中加入含有冻存液的细胞悬液，并先后在‑20℃冷藏2小时，‑80℃下冷冻备用，至此所述多孔板的每一个孔均形成无物理分隔的双层冷冻结构，上层为细胞悬液，下层为培养基；需要时将所述多孔板从‑80℃中取出，直接放入恒温培养箱，所述培养基和细胞溶液自行混合；待细胞沉降到多孔板底层，将多孔板中的液体去除，加入新鲜培养基。本发明方法可以实现细胞的冷冻、快速复苏与培养。

主权项

1.一种细胞冷冻、快速复苏与培养方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(1)使用0.2％-0.5％明胶包被多孔板，于恒温培养箱中放置1-2小时，去除多余的明胶；(2)将培养基加入所述包被后的多孔板中，于-80℃中冷冻1天以上，保存备用，其中，所述培养基的添加量为所述多孔板容量的1/3-1/4；(3)消化收集细胞，向所述细胞中加入预冷冻存液，获得待保存细胞悬液，并将所述待保存细胞悬液于4℃下冷藏0.5小时，其中，所述预冷冻存液的添加量为所述多孔板容量的1/3-1/4；(4)取出步骤(2)冷冻后的多孔板，向所述多孔板中加入所述待保存细胞悬液，先后在-20℃冷藏2小时，-80℃冷冻1天以上，至此，所述多孔板的每一个孔均形成无物理分隔的双层冷冻结构，上层为细胞悬液，下层为培养基，将所述多孔板置于-80℃中保存备用；(5)需要时将步骤(4)保存的多孔板从-80℃中取出，直接放入37℃CO2恒温培养箱中，使所述双层冷冻结构中的培养基和细胞悬液随着温度的升高而逐渐融化，所述培养基与细胞悬液自行混合；以及(6)待步骤(5)所述培养基与细胞悬液完全融化后，静置2小时，细胞沉降到多孔板底层，将多孔板中的液体去除，加入新鲜培养基，再置于37℃CO2恒温培养箱中进行细胞培养。