[发明专利]一种脑组织羰基化蛋白质提纯方法在审
| 申请号： | 201711468066.3 | 申请日： | 2017-12-29 |
| 公开（公告）号： | CN108226532A | 公开（公告）日： | 2018-06-29 |
| 发明（设计）人： | 刘文锋;李国林;印大中;胡慧;颜思宇 | 申请（专利权）人： | 湖南师范大学 |
| 主分类号： | G01N33/68 | 分类号： | G01N33/68;G01N1/34 |
| 代理公司： | 北京风雅颂专利代理有限公司 11403 | 代理人： | 曾志鹏 |
| 地址： | 410012 湖南省长沙市*** | 国省代码： | 湖南;43 |
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| 摘要： | 本发明属于生物样品的提纯制备领域，具体是涉及到一种脑组织羰基化蛋白质提纯方法，包括如下步骤：将含有羰基化蛋白质的样品和生物素酰肼混合，反应后，离心分离，得到生物素‑蛋白质；将生物素‑蛋白质和氰基硼氢化钠混合，过滤，然后用磷酸盐缓冲液超滤，得到蛋白质溶液；将蛋白质溶液和亲和素混合，离心，得到链接有亲和素的蛋白质溶液；将链接有亲和素的蛋白质溶液用D‑生物素洗脱，离心，分离，除去D‑生物素，洗涤，得到提纯后的羰基化蛋白质。本发明不需要通过电泳，提纯得到的羰基化蛋白质直接上机进行质谱鉴定与分析，可以分析出蛋白质氧化的情况，本发明提纯的是一类在体内被羰基化的蛋白质，而不是总蛋白，方便进行蛋白质组学分析。 | ||
| 搜索关键词： | 羰基化 蛋白质 生物素 蛋白质溶液 提纯 蛋白质提纯 脑组织 亲和素 链接 磷酸盐缓冲液 氰基硼氢化钠 蛋白质组学 生物样品 质谱鉴定 电泳 总蛋白 分析 超滤 上机 洗脱 酰肼 制备 洗涤 过滤 体内 | ||
【主权项】：
1.一种脑组织羰基化蛋白质提纯方法，其特征是，包括如下步骤：(1)将含有羰基化蛋白质的样品和生物素酰肼混合，混合液中生物素酰肼的浓度为1‑10mM，反应后，离心分离，得到生物素‑蛋白质；(2)将生物素‑蛋白质和氰基硼氢化钠在0‑5℃混合，混合液中氰基硼氢化钠的浓度为10‑20Mm，过滤，然后用磷酸盐缓冲液超滤，得到蛋白质溶液；(3)将蛋白质溶液和亲和素混合，0‑5℃反应，离心，得到链接有亲和素的蛋白质溶液；(4)将链接有亲和素的蛋白质溶液用D‑生物素洗脱，离心，分离，除去D‑生物素，洗涤，得到提纯后的羰基化蛋白质。
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