[发明专利]一种土壤中红霉素残留量的检测方法

摘要

一种土壤中红霉素残留量的检测方法，它涉及一种土壤中红霉素残留效价的检测方法，该方法包括对照品溶液的制备、供试品溶液的制备，之后采用高效液相色谱串联质谱法以梯度洗脱的方式将上述标准品溶液和供试品溶液注入液相色谱仪中，根据内标法计算红霉素效价。本发明通过对色谱条件的优选及供试品、标准品制备方法的试验，建立了土壤中红霉素的高效液相色谱串联质谱分析方法；通过对色谱分离系统的优化，建立了土壤中红霉素的检测方法，通过方法学验证试验研究表明：所建立的方法准确度高、专属性强、重现性良好，能有效检测土壤中红霉素效价。

主权项

1.一种土壤中红霉素残留量的检测方法，其特征在于它是按照以下步骤进行的：一、供试品样品制备：1)称取含有红霉素的土壤，加入提取剂乙腈‑Tris‑CaCl2溶液，涡旋振荡45～60s，然后在超声中辅助提取20～30min，再以3500～4000rpm离心5～10min，取上清液，收集沉淀；2)向步骤1)收集的沉淀中加入提取剂乙腈‑Tris‑CaCl2溶液，涡旋振荡45～60s，然后在超声中辅助提取20～30min，再以3500～4000rpm离心5～10min，取上清液；3)合并步骤1)和步骤2)的上清液，置于35～40℃水浴旋转蒸发至上清液体积的五分之一，得无机相；4)向无机相中加入pH为4～7的Tris‑CaCl2复溶液，震荡涡旋，待残渣全部溶解后，调节至pH＝8～10，再加入分散剂甲醇，萃取剂1,2‑二氯乙烷，涡旋30～45s，4000r/min离心5min，抽取下层液体；5)向步骤4)下层液体加入萃取剂1,2‑二氯乙烷涡旋30～45s，4000r/min离心5min，抽取下层液体；6)重复步骤1)至5)的操作，抽取下层液体；7)合并步骤5)和步骤6)的下层液体，用氮气吹至近干后用甲醇复溶，将复溶液过0.45μm滤膜后，即得供试品样品；二、标准曲线绘制：用甲醇将红霉素标准贮备液稀释成质量浓度为1.00mg/L、5.00mg/L、10.00mg/L、20.00mg/L、50.00mg/L、100.00mg/L、200.00mg/L、500.00mg/L和1000.00mg/L的标准工作溶液，采用高效液相色谱‑质谱法对上述标准工作溶液进行检测，以测得峰面积作为纵坐标，以标准工作溶液浓度作为横坐标，绘制标准曲线，并求回归方程和相关系数；三、吸取上述标准工作品溶液和供试品样品注入超高效液相色谱‑串联四级杆质谱仪中进行检测，根据内标法计算红霉素残留效价；色谱条件：色谱柱：ACQUITY UPLCBEH C18柱，色谱柱内径为2.1mm，柱长50mm，填料颗粒直径为1.7μm；流动相：0.1％甲酸水溶液+甲醇；流速：0.2mL/min；梯度：0～2.5min，55％A+45％B；2.5～4min，75％A+25％B；4～7min，90％A+10％B；7～8min，75％A+25％B；进样量：10μL；质谱条件：离子源:电喷雾离子源；检测模式:多反应监测；扫描方式:正离子扫描；脱溶剂气流量:900L/h；锥孔气流量:50L/h；毛细管电压:3.5kV；脱溶剂气温度:400℃；其中，含有红霉素的土壤与提取剂乙腈‑Tris‑CaCl2溶液的质量体积比为1g：12～17mL；步骤2)中沉淀与提取剂乙腈‑Tris‑CaCl2溶液的质量体积比为1g：12～17mL；无机相与pH为4～7的Tris‑CaCl2复溶液的体积比为4～8:10；步骤4)中无机相与分散剂甲醇和萃取剂1,2‑二氯乙烷的体积比为4～8:1:1。