[发明专利]一种用于动物组织总RNA提取的方法

摘要

本发明公开了一种提取动物组织总RNA的方法。本发明适用于任何畜禽品种，其提取效率高效、方便快捷、减少去RNA酶离心管和移液枪头的使用量，有效降低经济成本，也减少了实验耗材的去RNA酶的处理步骤，尤其对于实验环境条件较差或实验新手而言尤为有用。

主权项

一种用于动物组织总RNA提取的方法，其特征在于：包括如下步骤：1)样品采集：在干净的环境中采集动物组织，控制动物组织在空气中的暴露时间在1‑2min以内，将所采集的组织样品装入离心管中，迅速将装有组织样品的离心管投入液氮中速冻，以减少总RNA的降解和降低细胞内酶的活性；样品在‑80℃下保存；2)打开超净工作台，用酒精对超净工作台进行消毒，将灭菌后的研钵、剪刀、镊子，试剂，普通灭菌离心管、无RNA酶或普通灭菌移液枪头、微量移液枪及乳胶手套一起放入超净工作台，关闭日光灯，打开紫外灯，照射30min，通风10min；3)分别取30‑50mg冷冻保存组织于研钵中，加入液氮将组织充分研磨至粉末，每个样品研磨时间不超过4min，研磨过程中必须保持有液氮；4)将研磨好的样品加入已装有1mL Trizol试剂的离心管中，在2000‑2800r/min振荡混匀，冰上放置5‑10min，使得核酸与蛋白完全分离；5)加入0.22mL氯仿，漩涡振荡15s或上下颠倒摇晃1min，冰上放置3min，在4℃离心机12000×g离心15min。6)离心完成的溶液分为三层，上层为水相层，中间为白色杂质层，下层为粉红色有机层；悬空吸取上层水相层转移至干净的离心管中，分别加入600μL异丙醇、600μL氯化钠和柠檬酸钠混合液，轻柔上下颠倒混匀，冰上放置10min或‑20℃放置20min；7)12000×g 4℃离心10min，弃上清；8)加入1.2mL质量百分比为75％乙醇洗涤沉淀，轻柔上下颠倒，使白色沉淀悬浮；12000×g 4℃离心3min，弃上清；9)重复采用1.2mL质量百分比为75％乙醇洗涤沉淀，轻柔上下颠倒，使白色沉淀悬浮，置于冰上静置5min，7500×g 4℃离心5min，弃上清；10)7500×g 4℃离心30s，用移液枪头吸掉多余液体，室温干燥3‑5min；11)加入30‑50μL RNase‑free H2O或DEPC处理水，55‑60℃水浴2min，充分溶解RNA，立即冰浴2min，4000×g 4℃离心10‑15s，将所得到的RNA溶液置于‑80℃保存。