[发明专利]一种以胭脂红为探针的紫外分光光度法测定壳聚糖含量的方法

摘要

本发明涉及一种以胭脂红为探针的紫外分光光度法准确测定壳聚糖含量的方法，属于大分子检测领域。本发明利用壳聚糖在弱酸性条件下，与胭脂红结合生成缔合物，用分光光度计在514nm处测定其吸光度，通过吸光度与壳聚糖含量在一定的浓度范围内呈线性关系，以此作为壳聚糖的定量基础。建立了测定壳聚糖的紫外分光光度法，本方法测定受壳聚糖的分子量的影响，其具有试剂廉价，灵敏度高，重现性好和操作简便等优点，适合在实际应用中推广应用。

主权项

一种以胭脂红为探针的紫外分光光度法测定壳聚糖含量的方法，其包括下述步骤：1)绘制ΔA和不同分子量的壳聚糖浓度的标准曲线：向10mL比色管中加入3.0mL一定浓度梯度的低分子壳聚糖标准溶液，2.0mL的BR缓冲溶液，以及2.0mL浓度为1.0×10‑4mol/L的胭脂红溶液，使用蒸馏水定容后充分摇匀，在室温中静置5min后于紫外分光光度计上，在体系有最大吸收峰的波长514nm处以水为参比测量吸光度；其中试剂空白记为A0，含壳聚糖的溶液记为A，并计算ΔA＝A0‑A，建立ΔA与低分子壳聚糖浓度的标准曲线C1；使用中分子量壳聚糖溶液替换低分子壳聚糖溶液，建立ΔA与中分子壳聚糖浓度的标准曲线C2；使用高分子量壳聚糖溶液替换低分子壳聚糖溶液，建立ΔA与高分子壳聚糖浓度的标准曲线C3；2)30μg/mL的样品工作液的制备：将甲壳素胶囊去胶囊壳，称取0.04g于100mL容量瓶中，用0.5mol/L冰醋酸溶解，定容得样品储备液。用漏斗脱脂棉过滤储备液，滤液经6000r/min，离心机离心20min，取上清液7.5mL于100mL容量瓶，定容，得浓度为30μg/mL的样品工作液；3)根据壳聚糖分子量选择标准曲线：使用步骤1)中检测方法绘制ΔA和样品工作液的标准曲线，并将其与不同分子量的壳聚糖标准曲线比较，根据样品的ΔA和样品工作液的标准曲线的回归方程确定样品中的壳聚糖的分子量的大小，根据所对应的壳聚糖的分子量的大小确定所使用的回归方程；4)样品中壳聚糖含量确定：取样品工作液1mL，按步骤1)检测方法进行测定，在514nm处测定其吸光度值A，并计算ΔA＝A0‑A，将ΔA代入线性回归方程求得样品中壳聚糖的含量，同时做加标回收试验。