[发明专利]一种利用紫外分光光度法测定壳聚糖酸水解率的方法

摘要

本发明涉及一种利用紫外分光光度法测定壳聚糖酸水解率的方法，属于大分子水解技术领域。本发明以壳聚糖水解液中GAH的产率为指标，在氮气保护的环境下对壳聚糖水解条件进行优化，将采用乙酰丙酮法对水解条件进行筛选，优选最佳水解条件，并对壳聚糖水解生成产物氨基葡萄糖进行了验证，用紫外分光光度法测定氨基葡萄糖的含量。本发明具有成本低、工艺简单、产率高的特点，具有产业化的前景。

主权项

1.一种利用紫外分光光度法测定壳聚糖酸水解率的方法，其包括下述步骤：1)称取300mg壳聚糖加入烧瓶，量取40ml无机酸溶液加入烧瓶，密封装置，用真空泵抽尽空气，再通入氮气，重复3次；启动恒温磁力搅拌器，控制反应温度100℃、转速200r/min，反应时间为24h～48h，用取样针分别在不同时间取出适量水解液分别密封保存，作为样品，放置冰箱备用；2)紫外分光光度法测定氨基葡萄糖的含量：a)绘制A和不同浓度的氨基葡萄糖标准液的标准曲线：分别吸取1.5mL一定浓度梯度的氨基葡萄糖标准液于10mL比色管中用水定容至2mL，分别加入乙酰丙酮溶液1.5mL，摇匀，80℃水浴30min；取下冷却至室温，分别加对二甲氨基苯甲醛溶液5.0mL，加无水乙醇至10mL，60℃水浴60min，取下冷却至室温，以空白管作对照，在紫外分光光度计上测定波长534nm时吸光值；分别做三组平行试验，测各管吸光度；以测得吸光度A为纵坐标，氨基葡萄糖含量为横坐标，绘制标准曲线；b)样品工作液的制备：取步骤1)中水解液样品1.0mL于50mL容量瓶，用水定容至50mL后充分摇匀，即得样品工作液；C)样品中氨基葡萄糖的含量确定：取步骤b)中样品工作液1mL，按步骤a)检测方法进行测定，在534nm处测定其吸光度值A，将A代入线性回归方程求得样品中氨基葡萄糖的含量；3)壳聚糖水解液中氨基葡萄糖产率的计算公式为：式中：m1是由标准曲线计算得出盐酸氨基葡萄糖的含量，单位是μg/mL；m2是壳聚糖样品的含量，单位是μg/mL；0.8309是盐酸氨基葡萄糖折算为氨基葡萄糖的系数。