[发明专利]单细胞全基因组文库及制备其的组合索引方法在审
| 申请号： | 201780044234.8 | 申请日： | 2017-07-21 |
| 公开（公告）号： | CN110268059A | 公开（公告）日： | 2019-09-20 |
| 发明（设计）人： | 安德鲁·C·阿迪;莎拉·A·维塔克;弗兰克·J·斯蒂莫斯 | 申请（专利权）人： | 俄勒冈健康与科学大学;伊鲁米那股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 北京安信方达知识产权代理有限公司 11262 | 代理人： | 王玮玮;郑霞 |
| 地址： | 美国俄*** | 国省代码： | 美国;US |
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| 摘要： | 本文提供了用于制备包括来自多个单细胞的核酸的测序文库的方法。在一个实施方案中，测序文库包括来自多个单细胞的全基因组核酸。在一个实施方案中，方法包括通过化学处理生成核小体耗尽的细胞核，同时维持细胞核的完整性。本文还提供了组合物，诸如包含经化学处理的核小体耗尽的分离的细胞核的组合物。 | ||
| 搜索关键词： | 细胞核 测序文库 化学处理 全基因组 核小体 核酸 制备 耗尽 组合索引 文库 | ||
【主权项】：
1.一种制备包含来自多个单细胞的核酸的测序文库的方法，所述方法包括：(a)提供来自多个细胞的分离的细胞核；(b)使所述分离的细胞核经受化学处理以生成核小体耗尽的细胞核，同时维持所述分离的细胞核的完整性；(c)将所述核小体耗尽的细胞核的子集分布到第一多个隔室中并且使每个子集与转座体复合物接触，其中每个隔室中的所述转座体复合物包含转座酶和与其他隔室中的第一索引序列不同的第一索引序列；(d)将核小体耗尽的细胞核的所述子集中的核酸片段化成多个核酸片段，并且将所述第一索引序列掺入所述核酸片段的至少一条链中以生成包含加索引的核酸片段的加索引的细胞核，其中所述加索引的核酸片段保持附接至所述转座酶；(e)将所述加索引的细胞核组合以生成合并的加索引的细胞核；(f)将所述合并的加索引的细胞核的子集分布到第二多个隔室中；(g)将第二索引序列掺入每个隔室中的所述加索引的核酸片段中以生成双索引片段，其中每个隔室中的所述第二索引序列与其他隔室中的第二索引序列不同；(h)组合所述双索引片段，从而产生包含来自所述多个单细胞的全基因组核酸的测序文库。
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