[发明专利]通过定点DNA裂解和修复靶向原位蛋白质多样化

摘要

本发明涉及产生表达目的蛋白质的多种不同突变变体的一组细胞(即细胞库)的方法，其中每个细胞仅从单个基因拷贝中表达一种所述突变变体。本发明还涉及用于鉴定与相应的野生型目的蛋白质相比具有不同的或修饰的生物活性的目的蛋白质的突变变体的方法或细胞库。根据本发明，所鉴定的目的蛋白质的突变变体可用于白色生物技术。

主权项

1.一种产生表达目的蛋白质的突变变体的一组细胞的方法，其中所述目的蛋白质的所述突变变体之一是按每个细胞从单个基因拷贝表达，所述方法包括：a)在细胞基因组中的用于在编码所述目的蛋白质的基因中进行诱变的靶位点处或附近诱导双链断裂(DSB)或单链切口，其中所述编码所述目的蛋白质的基因是以单拷贝包含在所述细胞的基因组中，并且其中所述编码所述目的蛋白质的基因的单拷贝包含在所述用于诱变的靶位点处或附近的失活突变；b)优选地，向步骤a)的细胞提供不同供体核酸模板的库，用于经由同源重组来修复经诱导的DSB或单链切口，其中所述库的不同供体核酸模板在对应于所述用于诱变的靶位点的位置处包含不同的突变，并通过同源定向修复(HDR)去除所述失活突变；c)选择和/或富集已去除失活突变的细胞；和d)提供在步骤c)中选择的一组细胞，其是表达所述目的蛋白质的不同突变变体的一组细胞，其中所述目的蛋白质的所述不同突变变体之一是按每个细胞从单基因拷贝表达的。