[发明专利]用于将多肽负荷从细胞外空间递送至靶真核细胞的胞质溶胶和/或细胞核的合理设计的合成肽穿梭剂，其用途、与其相关的方法和试剂盒

摘要

本说明书涉及将多肽负荷从细胞外空间递送至靶真核细胞的胞质溶胶和/或细胞核的方法。该方法包括在肽穿梭剂存在下使细胞与多肽负荷接触，其浓度足以增加多肽负荷的转导效率。本文还描述了可以用于合理设计这种合成肽穿梭剂的参数，满足一个或多个这些设计参数的肽穿梭剂，以及关于使用合成肽穿梭剂将多种多肽负荷(例如转录因子、抗体、CRISPR相关核酸酶和功能基因组编辑复合物)从细胞外空间递送至靶真核细胞的胞质溶胶和/或细胞核的方法和组合物。还描述了用于基因组编辑的NK细胞用于改善免疫疗法的应用和靶标。

主权项

1.一种用于将多肽负荷从细胞外空间递送至靶真核细胞的胞质溶胶和/或细胞核的方法，所述方法包括在穿梭剂存在下使所述靶真核细胞与所述多肽负荷接触，与不存在所述穿梭剂相比，所述穿梭剂的浓度足以使所述多肽负荷的转导效率提高，其中所述穿梭剂是：(1)长度至少为20个氨基酸的肽，其包含：(2)具有带正电荷的亲水外表面的两亲性α‑螺旋基序，和(3)疏水外表面，其中，涉及以下参数(4)至(15)中的至少五个：(4)基于每圈有3.6个残基的α‑螺旋的开口圆柱形表示，所述疏水外表面包含由空间上相邻的L、I、F、V、W和/或M氨基酸组成的高疏水性核心，所述氨基酸代表所述肽的12％至50％的氨基酸；(5)所述肽的疏水力矩(μ)为3.5至11；(6)所述肽在生理pH下的预测静电荷为至少+4；(7)所述肽的等电点(pI)为8至13；(8)所述肽由35％至65％的氨基酸A、C、G、I、L、M、F、P、W、Y和V的任何组合组成；(9)所述肽由0％至30％的氨基酸N、Q、S和T的任何组合组成；(10)所述肽由35％至85％的氨基酸A、L、K或R的任何组合组成；(11)所述肽由15％至45％的氨基酸A和L的任何组合组成，条件是肽中存在至少5％的L；(12)所述肽由20％至45％的氨基酸K和R的任何组合组成；(13)所述肽由0％至10％的氨基酸D和E的任何组合组成；(14)所述肽中A和L残基的百分比(％A+L)与所述肽中K和R残基的百分比(K+R)之间的差异小于或等于10％；且(15)所述肽由10％至45％的氨基酸Q、Y、W、P、I、S、G、V、F、E、D、C、M、N、T和H的任何组合组成。