[发明专利]靶分子的串联条形码添加以便以单实体分辨率对靶分子进行绝对定量在审
| 申请号： | 201780080795.3 | 申请日： | 2017-11-23 |
| 公开（公告）号： | CN110114473A | 公开（公告）日： | 2019-08-09 |
| 发明（设计）人： | 迈克尔·里茨卡尔因克;斯特凡妮·博德雷 | 申请（专利权）人： | 斯特拉斯堡大学;法国国家科学研究中心 |
| 主分类号： | C12Q1/6806 | 分类号： | C12Q1/6806 |
| 代理公司： | 中原信达知识产权代理有限责任公司 11219 | 代理人： | 金海霞;刘慧 |
| 地址： | 法国斯*** | 国省代码： | 法国;FR |
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| 摘要： | 本发明涉及一种标记来自多个实体的任何靶分子，同时保持单个实体信息的完整性的新方法，所述标记优选以高通量方式进行，即允许每次运行分析数千个实体。这种方法基于串联分子条形码添加，其中用以下标记所有分子靶：第一唯一条形码，所述第一唯一条形码对于来自实体的每个分子靶是不同的，和标签序列，所述标签序列编码所述分子靶所来源的实体。一旦执行该串联条形码添加，就可以在下一代测序的单次运行中以单实体分辨率进行所有分子靶的绝对定量。本发明还涉及一种以单实体分辨率定量来自多个实体的一个或数个分子靶的方法，以及一种试剂盒和此种试剂盒用于根据本发明的方法标记来自多个实体的多个分子靶的用途。 | ||
| 搜索关键词： | 条形码 分辨率 串联 标签序列 种试剂盒 靶分子 单个实体 运行分析 高通量 测序 对靶 优选 | ||
【主权项】：
1.一种标记来自多个实体的多个分子靶，同时保持单个实体信息的完整性的方法，所述方法包含提供包含含有标记分子靶的液滴的第一组乳液液滴，其中这些液滴的每一个含有源自不超过一个实体的多个分子靶，并且其中在这些液滴的每一个中，用分子鉴定DNA序列标记每个分子靶，所述分子鉴定DNA序列包含(i)唯一分子鉴定(UMI)条形码，所述唯一分子鉴定(UMI)条形码对于每个分子靶是不同的，和(ii)突出端或产生突出端的限制性位点；提供包含含有实体鉴定序列的液滴的第二组乳液液滴，其中这些液滴的每一个含有至少一个实体鉴定序列，所述实体鉴定序列是包含唯一实体鉴定(UEI)条形码和产生突出端的限制性位点的DNA序列，所述唯一实体鉴定(UEI)条形码对于所述第二组的每个液滴是不同的；将所述第一组的液滴与所述第二组的液滴融合，其中将所述第一组的一个液滴与所述第二组的不超过一个液滴融合；和任选地在限制酶消化之后，将UEI条形码与标记分子靶连接，以及任选地破坏所述乳液。
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