[发明专利]唾液酸化化合物的体内合成

摘要

本发明属于合成生物学和代谢工程技术领域。具体而言，本发明属于代谢工程微生物的发酵技术领域。本发明描述了能够通过细胞内生物合成途径合成唾液酸化化合物的工程微生物。这些微生物可使N‑乙酰葡糖胺‑6‑磷酸去磷酸化为N‑乙酰葡糖胺，并将N‑乙酰葡糖胺转化为N‑乙酰甘露糖胺。这些微生物还能将N‑乙酰甘露糖胺转化为N‑乙酰神经氨酸。此外，本发明提供了通过在培养基中培养微生物来大规模体内合成唾液酸化化合物的方法，所述培养基任选地包含外源性前体，例如但不限于乳糖、乳N二糖、N‑乙酰乳糖胺和/或苷元，其中所述微生物在细胞内使N‑乙酰葡糖胺‑6‑磷酸去磷酸化为N‑乙酰葡糖胺，将N‑乙酰葡糖胺转化为N‑乙酰甘露糖胺，并将后者进一步转化为N‑乙酰神经氨酸。

主权项

1.在微生物中产生唾液酸化化合物的方法，所述方法包括：‑在培养基中培养微生物，所述培养基任选地包含外源性前体，其中所述微生物包含至少一种编码磷酸酶的核酸、至少一种编码N‑乙酰甘露糖胺差向异构酶的核酸和至少一种编码唾液酸合酶的核酸，且其中所述微生物不能i)将N‑乙酰葡糖胺‑6‑P转化为葡糖胺‑6‑P，ii)将N‑乙酰葡糖胺转化为N‑乙酰葡糖胺‑6‑P，和iii)将N‑乙酰神经氨酸转化为N‑乙酰甘露糖胺；和‑调节所述微生物中编码HAD类磷酸酶多肽的核酸的表达，其中所述HAD类磷酸酶多肽包含：‑至少下列基序之一：基序1：hDxDx[TV](SEQ ID NO:73)，或基序2：[GSTDE][DSEN]x(1‑2)[hP]x(1‑2)[DGTS](SEQ ID NO:74、75、76、77)，其中h表示疏水性氨基酸(A、I、L、M、F、V、P、G)，且x可以是任何不同的氨基酸；‑或SEQ ID NO:43、44、45、47、48、50、51、52、54、55或57中任一个的与所述多肽具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的总体序列同一性的同源物或衍生物。