[发明专利]快速高效的糖蛋白去糖基化在审
| 申请号： | 201780084044.9 | 申请日： | 2017-11-17 |
| 公开（公告）号： | CN110225925A | 公开（公告）日： | 2019-09-10 |
| 发明（设计）人： | 阿努什卡·塔库尔;谢杰·罗希尔;斯赫里瓦尔丹·帕蒂尔;米纳克什·苏达卡兰;拉克西米·阿迪卡里 | 申请（专利权）人： | 拜康有限公司 |
| 主分类号： | C07K16/00 | 分类号： | C07K16/00;C12N9/14;C12Q1/37 |
| 代理公司： | 广州华进联合专利商标代理有限公司 44224 | 代理人： | 刘培培;黄爱娇 |
| 地址： | 印度班*** | 国省代码： | 印度;IN |
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| 摘要： | 本发明公开了一种快速且经济有效的糖蛋白去糖基化方法，其中糖蛋白与阴离子表面活性剂及还原剂还有非离子表面活性剂组合，以获得稳定的变性的糖蛋白。进一步地，将内切糖苷酶加入到变性的糖蛋白中以切割N‑连接聚糖，以获得去糖基化的蛋白质。还提供了通过部分去糖基化评估蛋白质构象的快速工具，其中使用毛细管电泳(CE‑SDS)分析部分去糖基化的蛋白质。 | ||
| 搜索关键词： | 去糖基化 糖蛋白 变性 蛋白质 非离子表面活性剂 阴离子表面活性剂 蛋白质构象 毛细管电泳 内切糖苷酶 快速工具 还原剂 聚糖 切割 评估 分析 | ||
【主权项】：
1.一种使糖蛋白去糖基化的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(a)提供糖蛋白；(b)将糖蛋白与阴离子表面活性剂及还原剂组合，其中还原剂的量足以使所述糖蛋白变性；(c)将步骤(b)中的组分在90℃至100℃的温度下孵育2分钟至5分钟，以提供变性的糖蛋白；(d)使变性的糖蛋白冷却；(e)将变性的糖蛋白与非离子表面活性剂以抵消阴离子表面活性剂的抑制作用的量组合；(f)以每1mg变性的糖蛋白0.66个单位至10个单位的量引入内切糖苷酶以切割N‑连接聚糖；(g)将步骤(f)中的组分于37℃下孵育1至15分钟，以提供去糖基化的蛋白质；及(h)分离去糖基化的蛋白质与释放的聚糖。
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