[发明专利]一种高活性且抗逆性强的卵囊藻浓缩液及其制备方法和用途

摘要

本发明涉及水产养殖水质调控和水域环境治理技术领域，具体涉及一种高活性且抗逆性强的卵囊藻浓缩液及其制备方法和用途，制备方法包括纯种卵囊藻的分离和培育、高活性且抗逆性强的卵囊藻的选育、扩大培养、产业化培养以及收集、浓缩和等步骤，并在温度23～28℃、光照1800～2000Lx的条件下连续充气培养。与现有技术相比，本发明的卵囊藻浓缩液浓度可达1300～1500万个/ml，常温下保存95～105天，成活率达95％以上，方便储存、运输和使用；卵囊藻具有高活性和强抗逆性，其藻相稳定，能够长期保持养殖池的水质处于良性的平衡状态，可用于制备海水或半咸水海产品养殖池塘的藻相稳定剂，其具有非常好的产业化应用前景。

主权项

1.一种高活性且抗逆性强的卵囊藻浓缩液的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤一、纯种卵囊藻的分离由高产对虾养殖池中采集出卵囊藻样品，然后显微镜下分离并选取卵囊藻细胞；步骤二、纯种卵囊藻的培育将步骤一选取的卵囊藻细胞，接种至卵囊藻专用培养基中，在温度为23～28℃、光照1800～2000Lx的条件下连续充气培养纯化，12～18天后卵囊藻浓度达到65‑75万个/ml时停止充气，沉淀后排去上层清液，获得卵囊藻纯种液1号25ml；步骤三、高活性且抗逆性强的卵囊藻的选育(1)取步骤二制备的卵囊藻纯种液1号25ml，接种到装有5000ml卵囊藻专用培养基的三角烧瓶中，并在温度为23～28℃、光照1800～2000Lx的条件下连续充气培育，6～9天后卵囊藻浓度达到65‑75万个/ml时停止充气，沉淀后排去上层清液，获得卵囊藻纯种液2号250ml，卵囊藻浓度达到1300～1500万个/ml；(2)将步骤三(1)制备的卵囊藻纯种液2号250ml放于阴凉透气的环境中保藏，在静置中沉淀95～105天；(3)将步骤三(2)的经静置沉淀95～105天的卵囊藻纯种液2号接种到装有5000ml卵囊藻专用培养基的三角烧瓶中，并在温度为23～28℃、光照1800～2000Lx的条件下连续充气培育，12～18天后卵囊藻浓度达到65‑75万个/ml时停止充气，沉淀后排去上层清液，获得卵囊藻纯种液3号250ml，卵囊藻浓度为1300～1500万个/ml；(4)重复步骤(2)和步骤(3)的步骤，至少重复三次以上进行反复选育后，获得高活性且抗逆性强的卵囊藻藻种1号；步骤四、扩大培养(1)一级扩大培养：将步骤三(4)选育出的高活性且抗逆性强的卵囊藻种1号250ml，接种至装有一级扩大培养基的50000ml培藻罐中进行一级扩大培养，控制在温度为23～28℃、光照1800～2000Lx的条件下连续充气培养，5～9天后卵囊藻浓度达65‑75万个/ml，停止充气，沉淀后排去上层清液，获得一级扩大卵囊藻种2500ml，藻种浓度1300‑1500万个/ml；(2)二级扩大培养：将所述一级扩大卵囊藻种2500ml接种至装有二级扩大培养基的500000ml培藻罐中进行二级扩大培养，控制在温度为23～28℃、光照1800～2000Lx的条件下连续充气培养，5～9天后卵囊藻浓度达65‑75万个/ml，获得二级扩大培养藻种500000ml，藻种浓度65‑75万个/ml。步骤五、产业化培养(1)卵囊藻产业化车间和生产线的准备：每个车间设有供氧系统、温控系统、供水系统和光控系统，每个车间设置有至少一条卵囊藻生产线，每条生产线设置多个有效容量为200×104ml的培藻罐，培藻罐预先用100ppm的强氯精溶液彻底消毒，并用无菌海水清洗干净备用；(2)向每个培藻罐中加入无菌海水200×104ml、硝酸钾：100g、磷酸二氢钾：10g、三氯化铁：5g、维生素B1：3g、维生素B12：0.2g、氨基酸培藻素：6g、植物细胞分裂素：1000国际单位、九二0植物生长激素1200国际单位，连续充氧2h；(3)向每个培藻罐内接入所述二级扩大卵囊藻种25000ml，进行产业化培养，控制在温度为23～28℃、光照1800～2000Lx的条件下连续充气培养，5～7天后卵囊藻浓度达65‑75万个/ml，获得的卵囊藻液即可进行浓缩收集；步骤六、收集和浓缩将步骤五(3)获得的所述卵囊藻液抽到专用沉淀浓缩装置，经48小时沉淀，排掉上层清液，收取下层浓缩藻液，然后加入无菌海水、硝酸钾10ppm，磷酸二氢钾1ppm、维生素B10.1ppm，维生素B120.01ppm；用分光光度计进行检测，密度控制在1300～1500万个细胞/ml，即得到高活性且抗逆性强的卵囊藻浓缩液。