[发明专利]高产尿苷的基因工程菌及其构建方法与应用有效
| 申请号： | 201810020944.3 | 申请日： | 2018-01-10 |
| 公开（公告）号： | CN108130306B | 公开（公告）日： | 2019-03-05 |
| 发明（设计）人： | 谢希贤;陈宁;吴鹤云;李国梁;李强;范晓光;徐庆阳;张成林;李燕军;马倩 | 申请（专利权）人： | 天津科技大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/54;C12N15/70;C12P19/38 |
| 代理公司： | 北京瑞盛铭杰知识产权代理事务所(普通合伙) 11617 | 代理人： | 郭晓迪 |
| 地址： | 300222 天*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | 本发明提供一种高产尿苷的基因工程菌及其构建方法与应用，该菌是在大肠杆菌的基因组上整合了核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示的嘧啶核苷操纵子pyrBCAKDFE，并由强启动子Ptrc启动，重构了尿苷合成途径；在基因组上对其自身的PRPP合成酶编码基因prsA进行双拷贝，由强启动子Ptrc启动；同时缺失尿苷激酶(udk)、尿苷磷酸化酶(udp)和核苷水解酶(rihA、rihB和rihC)活性；缺失高丝氨酸脱氢酶1(thrA)活性；缺失鸟氨酸氨甲酰转移酶(argF)活性。该基因工程菌应用于发酵生产尿苷，在5L发酵罐发酵40‑70h可生产尿苷40‑67g/L，最大生产强度可达1.5g/(L×h)，糖苷转化率为15‑25％，是目前报道的发酵法生产尿苷的最高水平。 | ||
| 搜索关键词： | 基因工程菌 强启动子 基因组 构建 鸟氨酸氨甲酰转移酶 应用 高丝氨酸脱氢酶 合成酶编码基因 大肠杆菌 高产 发酵法生产 发酵罐发酵 核苷酸序列 糖苷转化率 合成途径 磷酸化酶 嘧啶核苷 激酶 操纵子 水解酶 核苷 拷贝 整合 重构 生产 发酵 | ||
【主权项】：
1.一种高产尿苷的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌是在大肠杆菌E. coli W3110的基因组上整合了核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示的嘧啶核苷操纵子pyrBCAKDFE，并由强启动子Ptrc启动；在基因组上对其自身的PRPP合成酶编码基因prsA进行双拷贝，并由强启动子Ptrc启动；同时缺失尿苷激酶udk、尿苷磷酸化酶udp以及核苷水解酶rihA、rihB和rihC活性；缺失高丝氨酸脱氢酶thrA活性；缺失鸟氨酸氨甲酰转移酶argF活性。
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