[发明专利]一种液相色谱串联质谱法测定腺苷脱氨酶活性及筛选其抑制剂的方法

摘要

本发明涉及一种液相色谱串联质谱法测定腺苷脱氨酶活性及筛选其抑制剂的方法，所述方法是通过将待测样品(全血、血清或血细胞)与底物腺苷进行反应，或者将待测样品(中药或化合物)与腺苷脱氨酶溶液及底物腺苷进行反应，然后通过液相色谱串联质谱法测定反应终止液中肌苷含量，再计算腺苷脱氨酶的活性。本发明的方法具有准确度、精密度、灵敏度高，稳定性好，操作简单，成本低，高通量的优点，为临床检测腺苷脱氨酶活性以诊断白血病、伤寒、系统性红斑狼疮、糖尿病、肝病、肿瘤等提供了一种更为有效的方法，也为筛选腺苷脱氨酶的抑制剂以治疗上述疾病提供了帮助。

主权项

1.一种液相色谱串联质谱法测定腺苷脱氨酶活性的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)酶促反应：向待测样品中加入底物腺苷进行反应，反应终止后制备反应终止液上清液；(2)液相色谱串联质谱法测定反应终止液上清液中肌苷含量；(3)计算腺苷脱氨酶的活性；步骤(2)中，液相条件如下：色谱柱：1.8μm的ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱；流动相：0.1％甲酸水‑甲醇；洗脱程序：等度洗脱；柱温：38‑42℃；流速：0.28‑0.32mL/min；进样体积：4.5‑5.5μL；质谱条件如下：扫描模式：正离子模式；鞘气N2流速：34‑36arb；辅助气N2的流量流速：9‑11arb；喷雾电压：1.9‑2.1kV；毛细管温度：310‑330℃；s‑lens射频水平：48‑52；辅助气加热器温度：290‑310℃。