[发明专利]一种根癌农杆菌介导的平菇菌丝遗传转化方法在审
| 申请号： | 201810036306.0 | 申请日： | 2018-01-15 |
| 公开（公告）号： | CN108004262A | 公开（公告）日： | 2018-05-08 |
| 发明（设计）人： | 蔡永萍;焦小雨;李国庆;王燕;金青;聂凡;林毅 | 申请（专利权）人： | 安徽农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/80 | 分类号： | C12N15/80 |
| 代理公司： | 北京高沃律师事务所 11569 | 代理人： | 刘奇 |
| 地址： | 230000 *** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种利用根癌农杆菌介导的平菇菌丝遗传转化方法，属于基因的遗传转化技术领域，包括以下步骤：1)质粒载体改造；2)改造后的质粒载体转化农杆菌，获得阳性菌；3)阳性菌侵染平菇菌丝，共培养得新长出的菌丝；4)将所述新长出的菌丝接种到含有潮霉素和头孢霉素的PDA培养基上选择培养5～7d，分离得到有抗生素抗性的平菇转化菌株；5)对所述平菇转化菌株进行转基因鉴定。本发明方法适用于平菇基因功能的验证及遗传改良育种等研究，具有操作简单、稳定性强、转化率高、成本低廉等优点。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 根癌农 杆菌 菌丝 遗传 转化 方法 | ||
【主权项】：
1.一种根癌农杆菌介导的平菇菌丝遗传转化方法，包括以下步骤：1)将转染用质粒载体的启动子改造为平菇同源启动子，获得改造质粒载体；所述转染用质粒载体为含有两个CaMV35S启动子的质粒载体；2)将步骤1)得到的所述改造质粒载体转化入根癌农杆菌感受态中，培养1～3d，获得阳性菌；3)将步骤2)得到的所述阳性菌侵染平菇菌丝，共培养2～4d，得新长出的菌丝；4)将步骤3)得到的所述新长出的菌丝接种到含有潮霉素和头孢霉素的PDA培养基上选择培养5～7d，分离得到有抗生素抗性的平菇转化菌株。
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