[发明专利]一种适用于椭偏成像传感器的双抗体夹心检测方法有效
| 申请号： | 201810039177.0 | 申请日： | 2018-01-16 |
| 公开（公告）号： | CN108254575B | 公开（公告）日： | 2019-12-10 |
| 发明（设计）人： | 牛宇;李一珂;刘巍;靳刚 | 申请（专利权）人： | 中国科学院力学研究所 |
| 主分类号： | G01N33/68 | 分类号： | G01N33/68;G01N33/96;G01B11/06 |
| 代理公司： | 11390 北京和信华成知识产权代理事务所(普通合伙) | 代理人： | 胡剑辉 |
| 地址： | 100190 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种适用于非实时类型椭偏成像传感器的双抗体夹心法，能够排除血清非特异性吸附对检测结果的影响，实现椭偏成像传感器对分子量为5KD‑25KD的小分子蛋白质的血清学检测。通过在反应基体表面逐层加入捕获抗体、待测物血清样本、检测抗体形成双抗体夹心结构，通过多次加入同种不同浓度的血清样本进行多次上述实验过程，并通过椭偏成像传感器将加入不同浓度血清样本前后的双层膜和三层膜的厚度进行统计，并通过二者差值得到加入检测抗体前后的变化值，将多个变化值用通式拟合出待测物浓度计算关系，通过上述计算关系能够得到不同浓度的待测物血清样本浓度。 | ||
| 搜索关键词： | 椭偏成像 传感器 血清样本 待测物 双抗体夹心 检测抗体 非特异性吸附 双抗体夹心法 小分子蛋白质 血清学检测 捕获抗体 反应基体 检测结果 浓度计算 浓度血清 实验过程 非实时 三层膜 双层膜 血清 拟合 样本 检测 统计 | ||
【主权项】：
1.一种适用于椭偏成像传感器的双抗体夹心法，其特征在于，包括以下步骤：/na.将捕获抗体加入反应基体，与其充分反应使所述捕获抗体固定在所述反应基体表面，之后使用缓冲液将未与反应基体连接的捕获抗体冲洗；/nb.加入封闭液对所述反应基体的非特异性位点进行封闭，反应完毕后使用缓冲液将多余的封闭液冲洗；/nc.加入待检测的血清样本使其与反应体系内的所述捕获抗体充分结合，形成捕获抗体和血清样本的双层膜复合物，使用缓冲液将未结合的血清样本冲洗之后，使用非实时性椭偏仪对形成的所述双层膜复合物进行成像，记录双层膜厚度D1；/nd.加入检测抗体，使其与反应体系内的所述血清样本充分结合，形成捕获抗体、血清样本和检测抗体的双抗体夹心复合物，使用缓冲液将未结合的检测抗体冲洗之后，使用非实时性椭偏仪对形成的所述双抗体夹心复合物进行成像，记录三层膜厚度D2；/ne.通过D2和D1的差值得到双抗体夹心复合物中由检测抗体带来的信号变化值；/nf.通过多次对同种不同浓度的血清样本重复进行步骤a～e，并对检测结果用通式进行拟合，得到血清样本浓度值的计算关系式：I＝A·c/(B+c)；其中，/nI为由检测抗体带来的信号变化值，c为血清样本浓度，A，B为常数。/n
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