[发明专利]利用转座酶对染色质开放区和线粒体甲基化研究的方法在审
| 申请号： | 201810040939.9 | 申请日： | 2018-01-16 |
| 公开（公告）号： | CN108300766A | 公开（公告）日： | 2018-07-20 |
| 发明（设计）人： | 谢丹;曹凤;张俊 | 申请（专利权）人： | 四川大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6806 | 分类号： | C12Q1/6806 |
| 代理公司： | 成都虹桥专利事务所(普通合伙) 51124 | 代理人： | 梁鑫 |
| 地址： | 610065 四川*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | 本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种利用转座酶对染色质开放区和线粒体基因组进行甲基化研究的方法。针对现有的线粒体基因组必须要提取DNA分离提纯才能进行甲基化研究的问题，本发明提供一种利用转座酶对染色质开放区和线粒体DNA进行甲基化研究的方法。本发明在细胞裂解后，采用Transposon复合物对染色质进行酶切，得到染色质开放区的DNA片段及线粒体DNA片段，再进行缺口补平、重亚硫酸氢盐转化，扩增后得到用于Illumina测序的文库，经Illumina测序后与参考基因组比对，得到甲基化修饰的胞嘧啶位点，即5mC位点。本发明可直接进行染色质开放区和线粒体的甲基化研究，简化了工序，提高了线粒体甲基化研究效率。 | ||
| 搜索关键词： | 甲基化 染色质 开放区 线粒体 转座酶 线粒体基因组 研究 测序 位点 线粒体DNA片段 基因工程技术 重亚硫酸氢盐 甲基化修饰 线粒体DNA 分离提纯 细胞裂解 提取DNA 胞嘧啶 复合物 基因组 比对 补平 扩增 酶切 文库 参考 转化 | ||
【主权项】：
1.利用转座酶对染色质开放区和线粒体甲基化研究的方法，其特征在于，包括以下步骤：a、细胞裂解后，采用Transposon复合物对染色质进行酶切，得到染色质开放区的DNA片段和/或线粒体DNA片段；b、对步骤a得到的DNA片段进行缺口补平，再进行重亚硫酸盐转化，然后用含IlluminaAdaptor序列的引物对重亚硫酸盐转化后得到的染色质开放区的DNA和/或线粒体DNA进行PCR扩增，得到用于Illumina测序的文库，经Illumina测序后与参考基因组比对，得到甲基化修饰的胞嘧啶位点，即5mC位点。
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