[发明专利]一种复合菌种发酵的益母增蛋散的制备方法

摘要

本发明属于微生物繁殖过程中添加中药的发酵技术，尤其涉及一种复合菌种发酵的益母增蛋散的制备方法；取益母增蛋散组方中的黄芪60份、熟地黄60份、当归80份、淫羊藿150份、女贞子150份、益母草150份、板蓝根80份、丹参50份、紫花地丁50份、山楂80份、地榆50份、甘草40份；采用复合菌种固态发酵菌种发酵，菌种分别为：枯草芽孢杆菌、保加利亚乳杆菌、植物乳杆菌、嗜热链球菌和双歧杆菌、益母草内生菌1号；使用复合菌种发酵后的益母增蛋散，是一种完全取代抗生素的无药残、防病促生长的中药微生态制剂，使用复合菌种发酵后的益母增蛋散生产的兽药其免疫能力远远超过其它类产品及普通的益母增蛋散。 1

主权项

1.一种复合菌种发酵的益母增蛋散的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：

步骤1）、取益母增蛋散组方中的黄芪60份、熟地黄60份、当归80份、淫羊藿150份、女贞子150份、益母草150份、板蓝根80份、丹参50份、紫花地丁50份、山楂80份、地榆50份、甘草40份；水洗后烘干、然后粉碎成粉末，粉末大小为50‑100目；得到中药粉剂，备用；

步骤2）、采用复合菌种固态发酵菌种发酵，采用的复合菌种固态发酵菌种分别为：枯草芽孢杆菌、保加利亚乳杆菌、植物乳杆菌、嗜热链球菌和双歧杆菌；

步骤3）、将枯草芽孢杆菌放入由5%红糖、0.3%磷酸二氢钾、0.5%酵母膏和使用蒸馏水定容至1000毫升的培养基中，接种量为1~2%；使用恒温摇床在34度环境下培养24小时获得枯草芽孢杆菌原菌液；使用同样的培养基和培养环境及方法分别获得保加利亚乳杆菌原菌液、植物乳杆菌原菌液、嗜热链球菌原菌液、双歧杆菌原菌液、益母草内生菌1号原菌液；然后分别对枯草芽孢杆菌原菌液、保加利亚乳杆菌原菌液、植物乳杆菌原菌液、嗜热链球菌原菌液、双歧杆菌原菌液、益母草内生菌1号原菌液进行提纯；

步骤4）、将提纯后的枯草芽孢杆菌原菌液和益母草内生菌1号原菌液，从斜面接入三角瓶中，振荡培养24小时；将提纯后的保加利亚乳杆菌原菌液、植物乳杆菌原菌液、嗜热链球菌原菌液和双歧杆菌原菌液，从斜面接入克氏瓶中，温度控制34℃，培养24小时；

步骤5）、将步骤4）中培养后的枯草芽孢杆菌原菌液、保加利亚乳杆菌原菌液、植物乳杆菌原菌液、嗜热链球菌原菌液、双歧杆菌原菌液、益母草内生菌1号原菌液混合均匀，各个原菌液的占比为：枯草芽孢杆菌原菌液15~25%、保加利亚乳杆菌原菌液15~25%、植物乳杆菌原菌液15~25%、嗜热链球菌原菌液15~25%、双歧杆菌原菌液15~25%、益母草内生菌1号原菌液15~25%，混合均匀后获得菌种原液，备用；

步骤6）、培养基的制备；培养基采用红糖、中药粉剂和水制成，红糖1~2%，中药粉剂55~60%，余量为蒸馏水，得到培养基，备用；

步骤7）、将步骤6）获得的培养基加热至34℃时接种，将步骤5）得到的菌种原液接种到培养基中，接种量为4％；采用厌氧发酵，温度34℃，发酵时间48~72小时，当PH值达到4.0时完成发酵，发酵完成以后晒干即得所述的复合菌种发酵的益母增蛋散。

2.根据权利要求1所述的复合菌种发酵益母增蛋散的制备方法，其特征在于：所述的益母草内生菌1号的分离方法如下：

取益母草切成1cm长小块，依次进入75%酒精内1分钟，1%次氯酸钠溶液15分钟，然后再用75%酒精浸泡1分钟，去除表面菌株之后，再用蒸馏水冲洗5遍；插入含有双抗WA培养基中，放在恒温培养箱中28度培养；观察到有0.5cm的菌丝从益母草切口处长出后，将菌丝转接到PDA培养基中培养；内生菌菌种纯化采用平板分离法；分离后培养细菌，然后将细菌产物按照益母草药典标准检测法进行测量，最后找到一株囊孢菌，产生益母草碱类似成分，即为所述的益母草内生菌1号。

3.根据权利要求2所述的复合菌种发酵益母增蛋散的制备方法，其特征在于：所述的双抗WA培养基的制备方法为：取琼脂20克，加水定容到1000毫升，加入效价为200 ,150IU/ml的青霉素和链霉素，既得所述的双抗WA培养基。

4.根据权利要求2所述的复合菌种发酵益母增蛋散的制备方法，其特征在于：所述的PDA培养基的制备方法为：取马铃薯200克，切成块煮沸30分钟，用纱布过滤，再加入20克葡萄糖和20克琼脂，溶化后补足水至1000毫升，既得所述的PDA培养基。