[发明专利]一种特异性靶向hDGKθ基因的荧光素酶报告系统有效
| 申请号： | 201810054844.2 | 申请日： | 2018-01-19 |
| 公开（公告）号： | CN108359692B | 公开（公告）日： | 2022-03-15 |
| 发明（设计）人： | 夏海滨;单琳琳;张伟锋;赵俊丽 | 申请（专利权）人： | 陕西师范大学 |
| 主分类号： | C12N15/90 | 分类号： | C12N15/90;C12N9/22 |
| 代理公司： | 西安恒泰知识产权代理事务所 61216 | 代理人： | 李郑建 |
| 地址： | 710062 *** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种特异性靶向hDGKθ基因的荧光素酶报告系统，由打靶载体和打靶供体两部分组成，其中，打靶供体携带需要引入的外源DNA片段，该外源DNA片段包括T2A小肽、荧光素酶基因cDNA序列、eGFP表达框、Neomycin基因序列和上、下游同源臂序列；打靶载体含有核酸酶Cas9表达框和靶向hDGKθ的引导链sgRNA表达框。该报告系统的建立方法，包括筛选靶向hDGKθ基因3′非编码区的sgRNA，构建携带Cas9、sgRNA表达元件的真核表达载体作为打靶载体，构建携带荧光素酶基因cDNA序列以及用于定点整合的上、下游同源臂和筛选基因的打靶供体，将这两种载体共同转染目标细胞，利用抗性基因筛选，即可完成靶向hDGKθ的荧光素酶报告系统在目标细胞中的建立。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 特异性 靶向 hdgk 基因 荧光 报告 系统 | ||
【主权项】：
1.一种特异性靶向hDGKθ基因的荧光素酶报告系统，其特征在于，该特异性靶向hDGKθ基因的荧光素酶报告系统由打靶载体和打靶供体两部分组成，其中：所述打靶供体携带需要引入的外源DNA片段，该外源DNA片段包括荧光素酶基因cDNA序列、eGFP表达框、Neomycin基因序列和上、下游同源臂片段；所述的打靶载体含有核酸酶Cas9表达框，同时还含有靶向hDGKθ的引导链sgRNA表达框。
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