[发明专利]一种适用于In-Fusion克隆的pGADT7-In载体及其构建和使用方法

摘要

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种适用于In‑Fusion克隆的pGADT7‑In载体及其构建和使用方法。本发明利用定点突变技术对pGADT7的多克隆位点进行改造获得pGADT7‑In载体，使pGBKT7和pGADT7‑In两个载体在被EcoRⅠ酶切后形成的末端含有长15bp以上相同的序列，进一步用In‑Fusion技术进行载体构建。构建一个给定的基因的诱饵载体或猎物载体只需一对引物，进行一次PCR。将得到的PCR产物和pGBKT7或pGADT7进行In‑Fusion反应，转化大肠杆菌，涂布不同抗性LB平板，用菌落或菌液PCR进行鉴定，很容易快速高效完成诱饵载体或猎物载体的构建。使用本发明的pGADT7‑In载体和构建载体的方法进行酵母双杂交载体构建，极大地缩短实验周期，降低实验成本，提高成功率。

主权项

1.一种适用于In‑Fusion克隆的pGADT7‑In载体，其特征在于，所述pGADT7‑In载体是由pGADT7载体定点突变获得，pGADT7‑In载体和pGBKT7载体上多克隆位点中EcoRⅠ酶切位点的上下游具有一段长15bp以上的相同序列。