[发明专利]一种测定氨基酸螯合物螯合率的检测方法

摘要

本发明公开了一种测定氨基酸螯合物螯合率的检测方法，其主要原理是：氨基酸螯合物试样经加热溶解、离心分离，分成沉淀态螯合元素、可溶性螯合元素及游离态金属离子；可溶性螯合元素及游离态金属离子经过凝胶色谱，在规定条件下洗脱，实现可溶性螯合态金属元素及游离态金属离子的分离，用原子吸收光谱法分别测定沉淀态螯合元素、可溶性螯合元素及游离态金属离子的含量，即可计算出相应的氨基酸螯合物的螯合率。本发明方法操作简单，可用于测定各种金属离子（如钙、镁、锌、铜、锰、钒）氨基酸螯合物的螯合率，节约生产成本。

主权项

1.一种测定氨基酸螯合物螯合率的检测方法，其特征在于，测定步骤如下：1）试样预处理称取待测的氨基酸螯合物试样1.0g，置于50mL离心管中，加入30mL水，于60℃水浴中，加热30min，不断搅拌，使试样充分溶解，于2500r/min离心10min；将上清液移入50mL容量瓶中，沉淀用60℃热水洗涤三次，离心，上清液一并移入50mL容量瓶中，定容，得可溶性螯合态金属元素溶液，称为A液；沉淀用10mL1︰10盐酸溶液溶解后，转入50 mL容量瓶中，用水稀释至刻度，得沉淀态螯合态金属元素溶液，称为B液；2）凝胶色谱柱的制备称取10g葡聚糖凝胶，加入200mL水配制成粘稠的悬浮液，静置3h，搅拌，沿玻璃棒将排尽气泡的凝胶悬浮液一次倾入色谱柱内，待凝胶全部倾入柱内后，开启柱下面的出口开关，流出液体，使凝胶自然沉降，控制凝胶部分长度为20cm；用50mLPH7.0的洗脱液洗涤凝胶色谱柱，排出洗脱液至凝胶表面近于流干，关闭出口开关；3）上样用移液管移取0.2mL溶液A，使之均匀渗入凝胶床表面；打开出口开关，使样品液流入凝胶床，用少量洗脱液洗涤柱壁周围及残留在床表面的样品液；注入洗脱液，测定钙、铜、镁、锌的螯合物时，用PH9.0的洗脱液，测定锰和钒的螯合物时，用PH10.0的洗脱液；4）洗脱分离用相应PH值的洗脱液洗脱，流速为0.7mL/min，收集洗出组分，定容至100mL，得可溶性螯合金属元素溶液，称为C液；可溶性螯合金属元素溶液收集完成后，在凝胶柱顶端用吸管移入4mL浓度为0.1mol/L 的EDTA溶液，用PH7.0的洗脱液继续洗脱，合并所有洗出组分，定容至100 mL，得游离态金属离子溶液，称为D液；5）螯合率测定取上述A、B、C、D溶液各10mL，按GB/T13885用原子吸收光谱法，分别测定各溶液中金属离子的含量，按下列公式计算氨基酸螯合物中金属离子的螯合率：螯合率（%）＝〔× + 〕×100%式中：Ma、Mb、Mc、Md分别为A、B、C、D溶液中金属离子的含量（μg/mL）；Va、Vb、Vc、Vd分别为A、B、C、D溶液的体积（mL）。