[发明专利]一种制备4-羟基-L-苏氨酸的工艺有效
| 申请号： | 201810060525.2 | 申请日： | 2018-01-22 |
| 公开（公告）号： | CN108239664B | 公开（公告）日： | 2020-01-03 |
| 发明（设计）人： | 王俊梅;何遂平;张新帅;黄华;刘建 | 申请（专利权）人： | 深圳瑞德林生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12P13/04 | 分类号： | C12P13/04 |
| 代理公司： | 44285 深圳市深佳知识产权代理事务所(普通合伙) | 代理人： | 王仲凯 |
| 地址： | 518000 广东省*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明涉及生化技术领域，公开了一种固定化酶串联法制备4‑羟基‑L‑苏氨酸的工艺。本发明利用L‑苏氨酸致活酶耦合L‑苏氨酸醛缩酶至完全转化，采用Adk和PaP或其融合蛋白酶与廉价的多聚磷酸适时循环再生ATP，反应过程简单、操作方便、产品质量稳定，较好的实现了原料的连续转化以及辅酶ATP的再生，配合稳定的固定化酶，能循环利用多次，从而大大的降低了生产成本。本发明工艺有效的避免了化学合成技术里的多步基团保护、手性拆分等繁琐过程，同时也避免了微生物发酵所带来的代谢物、蛋白等杂质对后期产品纯化的影响，非常适合工业化大规模生产。 | ||
| 搜索关键词： | 固定化酶 苏氨酸 羟基 化学合成技术 苏氨酸醛缩酶 蛋白酶 微生物发酵 产品纯化 多聚磷酸 繁琐过程 基团保护 连续转化 生化技术 循环利用 循环再生 质量稳定 耦合 代谢物 辅酶 手性 制备 生产成本 串联 蛋白 再生 融合 转化 配合 | ||
【主权项】：
1.一种制备4-羟基-L-苏氨酸的工艺，其特征在于，包括：/n步骤1、羟基乙醛与甘氨酸在L-苏氨酸醛缩酶的催化下生成4-羟基-L-苏氨酸；/n步骤2、步骤1中的4-羟基-L-苏氨酸在ATP、苏氨酸致活酶的催化下生成4-羟基磷酸-L-苏氨酸和ADP；/n步骤3、步骤2中的ADP在多聚磷酸、腺苷酸激酶与多聚磷酸-AMP磷酸转移酶的催化下生成ATP，重新进入到步骤2中；步骤2中的4-羟基磷酸-L-苏氨酸与钠盐生成4-羟基磷酸-L-苏氨酸钠，然后在焦磷酸水解酶的催化下生成4-羟基-L-苏氨酸；/n其中，腺苷酸激酶与多聚磷酸-AMP磷酸转移酶以融合酶形式参与反应，所采用的L-苏氨酸醛缩酶、苏氨酸致活酶、腺苷酸激酶、多聚磷酸-AMP磷酸转移酶、焦磷酸水解酶的氨基酸序列依次如SEQ ID NO:1-5所示，融合酶Adk-PaP的序列为通过连接短肽连接的SEQ IDNO:3-4序列。/n
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