[发明专利]一种氨基糖苷类双功能修饰酶AAC(6′)-APH(2″)抑制剂的筛选方法

摘要

本发明公开了一种氨基糖苷类双功能修饰酶AAC(6′)‑APH(2″)抑制剂的筛选方法，包括如下步骤：采用化学法进行aac(6′)‑aph(2″)的基因合成，表达并纯化氨基糖苷类双功能修饰酶AAC(6′)‑APH(2″)；建立氨基糖苷类双功能修饰酶AAC(6′)‑APH(2″)的体外反应体系，将待筛选物质与氨基糖苷类抗生素和辅酶因子进行混合，加入氨基糖苷类双功能修饰酶AAC(6′)‑APH(2″)使之反应，同时设立空白对照组，用水代替待筛选物质；采用内标法对反应产物进行高效液相分离和质谱定量检测；计算抑制率，筛选出对氨基糖苷类双功能修饰酶AAC(6′)‑APH(2″)具有抑制作用的活性物质。本发明公开的方法操作简单、灵敏度高、可重复性强，假阳性概率低。样品前处理简单，检测结果直观，大大提高了筛选AAC(6′)‑APH(2″)抑制剂的速度和成功率，可以对大批量样品库进行筛选，更具实用性。

主权项

1.一种氨基糖苷类双功能修饰酶AAC(6′)‑APH(2″)抑制剂的筛选方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)采用化学法进行aac(6′)‑aph(2″)的基因合成，表达并纯化氨基糖苷类双功能修饰酶AAC(6′)‑APH(2″)；(2)建立氨基糖苷类双功能修饰酶AAC(6′)‑APH(2″)的体外反应体系，将待筛选物质与氨基糖苷类抗生素和辅酶因子进行混合，加入氨基糖苷类双功能修饰酶AAC(6′)‑APH(2″)使之反应，同时设立空白对照组，用水代替待筛选物质；(3)采用内标法对反应产物进行高效液相分离和质谱定量检测；(4)计算抑制率，筛选出对氨基糖苷类双功能修饰酶AAC(6′)‑APH(2″)具有抑制作用的活性物质：