[发明专利]虹鳟抗传染性造血器官坏死病卵黄抗体的制备及其应用

摘要

本发明公开了一种虹鳟抗传染性造血器官坏死病卵黄抗体的制备及其应用，制备方法包括以下步骤：S1.IHNV灭活抗原制备；S2.蛋鸡免疫；S3.免疫鸡蛋卵黄收集；S4.卵黄抗体的去脂提纯，三次添加饱和硫酸铵溶液提纯IHNV卵黄抗体；本方法制备得到的传染性造血器官坏死病毒（IHNV）卵黄抗体性质稳定，效价高，可用于工业大规模制备IHNV卵黄抗体。本发明的制备方法所制得的卵黄抗体可用于治疗传染性造血器官坏死病，具有广阔的应用前景。

主权项

1.虹鳟抗传染性造血器官坏死病卵黄抗体的制备，其特征在于，包括如下步骤：S1. IHNV灭活抗原制备：将IHNV毒液加入到FHM细胞中培养得到IHNV病毒液，并以β‑丙内酯为灭活剂制得IHNV灭活抗原；S2. 蛋鸡免疫：用S1制得的IHNV灭活抗原免疫蛋鸡；S3.高免蛋卵黄收集：采集免疫后蛋鸡的鸡蛋得到高免蛋，高免蛋消毒晾干后采集卵黄，并剪破卵黄膜得到卵黄液；S4. 卵黄抗体去脂提纯，包括如下步骤：S4.1.卵黄抗体液提取：取S3步骤中得到的卵黄液，在卵黄液中加入生理盐水并搅拌，其中卵黄液和生理盐水的体积比为1：（0.8‑1.2），将混合液室温静置后于3℃‑6℃离心，收集上清液；S4.2.去脂：取S4.1中得到的上清液，在上清液中加入氯仿并搅拌，其中上清液和氯仿的体积比为1：（0.9‑1.1），将混合液于‑30℃~‑10℃静置，之后于3℃‑6℃离心，收集上清液得到IgY提取液；S4.3.初次沉淀提纯：取S4.2中得到的IgY提取液，在IgY提取液中加入饱和硫酸铵溶液并搅拌，其中IgY提取液和饱和硫酸铵溶液的体积比为（1.8~2.3）：1，将混合液于3℃‑6℃静置，之后于3℃‑6℃离心，分别收集上清液和沉淀；S4.4.二次沉淀提纯：取S4.3中得到的上清液，在上清液中加入饱和硫酸铵溶液并搅拌，其中上清液和饱和硫酸铵溶液的体积比为（0.95~1.05）：1，将混合液将混合液于3℃‑6℃静置，之后于3℃‑6℃离心，弃上清，收集沉淀；S4.5.重悬提纯：取S4.3和S4.4中得到的沉淀，加入PBS溶液重悬沉淀得到上清液，在所得上清液中缓慢加入缓慢饱和硫酸铵溶液并搅拌，其中上清液和饱和硫酸铵溶液的体积比为（1.8~2.3）：1，将混合液将于3℃‑6℃静置，之后于3℃‑6℃离心收集沉淀；S4.6. 透析浓缩：用PBS溶液洗涤S4.5中得到的沉淀，之后加入PBS溶液重悬沉淀得到沉淀悬浊液，然后沉淀悬浊液经透析和浓缩后得到IHNV卵黄抗体。