[发明专利]一种高通量筛选优质卵母细胞的方法有效
| 申请号： | 201810072343.7 | 申请日： | 2018-01-25 |
| 公开（公告）号： | CN108004204B | 公开（公告）日： | 2021-05-11 |
| 发明（设计）人： | 肖红卫;张立苹;华再东;任红艳;李莉;华文君;毕延震;刘西梅;郑新民;李会锋 | 申请（专利权）人： | 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所 |
| 主分类号： | C12N5/075 | 分类号： | C12N5/075 |
| 代理公司： | 北京精金石知识产权代理有限公司 11470 | 代理人： | 强红刚 |
| 地址： | 430064 湖北省武汉市*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种高通量筛选优质卵母细胞的方法，该方法首先通过成熟液Ⅰ和Ⅱ让卵母细胞在体外培养环境达到成熟，再通过脱卵丘溶液进行脱卵丘细胞，同时对卵母细胞的细胞膜结构的完整性进行初选，半透膜结构不完整的卵母细胞不会出现卵周隙，在此过程中可以淘汰一部分劣质卵母细胞；最后在等渗无激素溶液中复选，如果初选的卵母细胞的细胞膜不能恢复到脱卵丘溶液处理之前的状态，则这种卵母细胞也必须淘汰，从而可快速高通量筛选出优质卵母细胞，用于生产性克隆工作的开展。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 通量 筛选 优质 细胞 方法 | ||
【主权项】：
1.一种高通量筛选优质卵母细胞的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：(1)将挑选的卵丘卵母细胞复合体移入成熟液Ⅰ中培养，所述的成熟液Ⅰ的组成为：TCM199+2.90～3.15mM葡萄糖+0.85～0.95mM丙酮酸钠+0.52～0.60mM L-半胱氨酸+90～110IU/mL青霉素+90～110μg/mL的硫酸链霉素+9％～11％卵泡液+9～11IU/mL PMSG+9～11IU/mL hCG；(2)将步骤(1)培养后的卵丘卵母细胞复合体移入成熟液Ⅱ中培养，所述的成熟液Ⅱ的组成为：TCM199+2.90～3.15mM葡萄糖+0.85～0.95mM丙酮酸钠+0.52～0.60mM L-半胱氨酸+90～110IU/mL青霉素+90～110μg/mL的硫酸链霉素+9％～11％卵泡液；(3)将骤(2)培养的卵丘卵母细胞复合体移入脱卵丘溶液中，震荡处理0.5-2min，然后转移出现卵周隙的卵母细胞进行下一步操作，所述的脱卵丘溶液组成为：PVA-TL-Hepes+15～25mg/mL透明质酸酶+9～15mg甘露醇+0.15～0.30mg BSA；(4)将骤(2)初选的卵母细胞移入等渗无激素溶液中洗涤，淘汰卵胞质膜不能恢复的卵母细胞，所述的等渗无激素溶液的组成为：TCM199+2.90～3.15mM葡萄糖+0.85～0.95mM丙酮酸钠+0.52～0.60mM L-半胱氨酸+90～110IU/mL青霉素+90～110μg/mL的硫酸链霉素+19％～11％卵泡液+7～9mg/mL Hepes。
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