[发明专利]一种环状哑铃形探针及其应用

摘要

本发明公开了一种环状哑铃形探针及其应用，本发明设计了两种环形哑铃状探针，然后再利用此探针进行链杂交反应扩增检测待测目标物的浓度并应用于细胞内靶序列的原位成像。该方法较现有的链杂交扩增方法克服线性探针或发夹探针在细胞内易水解的缺陷，发现了环形核酸探针有强的耐水解性能，并将环形探针结合链杂交反应用于活细胞内靶序列成像降低了假阳性和背景信号，提高了检测准确度。

主权项

1.一种检测靶序列的环状哑铃形探针，所述探针包括2种不同环状哑铃形探针，分别记为P1和P2，P1和P2均为闭合的碱基序列，均呈哑铃形，两端的环部通过中间的颈部连接在一起，颈部由反向互补配对的碱基对组成；P1中含有与靶序列反向互补配对的片段X，X中的部分碱基序列位于环部，该部分序列称为toehold序列，X中剩下序列位于颈部；P2中含有能够与P1部分序列进行反向互补配对的片段Y，片段Y与片段X不能反向互补配对，Y中的部分碱基序列位于环部，该部分序列称为toehold序列，Y中剩下序列位于颈部；P2中还含有片段Z能够与P1部分序列进行反向互补配对；Z中的部分碱基序列位于环部，该部分序列称为toehold序列，Z中剩下序列位于颈部；当有靶序列存在时，靶序列与探针P1中的片段X互补配对后，打开探针P1；打开的探针P1与P2中的片段Y互补配对后，打开探针P2；打开的探针P2再通过片段Z与探针P1互补配对后，打开探针P1；打开的探针P1再与新的探针P2结合而打开新的探针P2，打开的新探针P2再与新的探针P1结合，如此循环往复；当没有靶序列存在时，探针P1和P2能够彼此稳定独立存在，保持环状哑铃形；探针P1或/和P2中含有荧光标记，使P1或/和P2发生链杂交反应后发出荧光信号。