[发明专利]一种具有免疫调节作用的大石花菜多糖的制备方法及结构部分表征及其应用

摘要

本发明涉及一种大石花菜多糖及其制备方法和用途，属于天然高分子领域。本发明提供一种从大石花菜中提取分离多糖的方法、该多糖的化学结构及其用途。利用GPC测定平均相对分子量和GC‑MS分析单糖组成，发现本发明大石花菜多糖A‑11平均相对分子量为28807Da，主要由木糖和半乳糖组成，还发现痕量的鼠李糖、阿拉伯糖、岩藻糖、阿洛糖、果糖，葡萄糖和甘露糖。同时，本发明的大石花菜多糖A‑11，显著抑制LPS诱导THP‑1产生的细胞毒性，保护细胞免受损害；又能够调节免疫信号通路中信号因子MyD88和TRAF‑6的表达从而提高人体免疫力。 1

主权项

1.一种具有免疫调节作用的大石花菜多糖的制备方法，其特征在于，所述的制备方法包括如下步骤：

(1)大石花菜的水提液浓缩后加入乙醇，收集沉淀；

(2)步骤(1)获得的沉淀去除蛋白质得到大石花菜粗多糖；

(3)步骤(2)获得的大石花菜粗多糖经阴离子交换柱层析得到大石花菜多糖A‑1；

(4)大石花菜多糖A‑1经凝胶柱层析得到大石花菜纯多糖A‑11，即具有免疫调节作用的大石花菜多糖。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)通过Sevage法去除蛋白质。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)为：步骤(2)获得的大石花菜粗多糖经DEAE‑52阴离子交换柱层析、浓缩、透析、冷冻干燥得到大石花菜多糖A‑1。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(4)为：大石花菜多糖A‑1经Sephadex G‑100凝胶柱层析、浓缩、透析、冷冻干燥得到大石花菜纯多糖A‑11，即具有免疫调节作用的大石花菜多糖。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)的柱层析步骤中依次用浓度为0、0.1、0.3、0.5、0.7、1.0mol/LNaCl溶液洗脱；步骤(4)的柱层析步骤中用0.3mol/LNaCl溶液洗脱。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的制备方法包括如下步骤：

(1)将干燥大石花菜粉碎、过20目筛；大石花菜粉末按照料液比1:30，80℃超声辅助提取2.5小时，得水提液，60℃减压浓缩，向浓缩液加入两倍体积的无水乙醇，室温下静置12小时沉淀多糖，8000rpm、10分钟、4℃离心收集沉淀；

(2)蒸馏水溶解沉淀，使用Sevage法除去水提液蛋白质，静置12小时，8000rpm离心10分钟取上清液，随后60℃减压浓缩除去有机试剂并将溶液浓缩冷冻干燥得粗多糖；

(3)取上述粗多糖配置成浓度为20mg/mL的溶液，0.45μm滤膜过滤后，经DEAE‑52纤维素离子交换柱分离，上样量为5mL，依次用浓度为0、0.1、0.3、0.5、0.7、1.0mol/LNaCl溶液洗脱，自动部分收集器收集，流速为1mL/min，6分钟每管；采用苯酚‑硫酸法检测，以试管号为横坐标，吸光度为纵坐标绘制洗脱曲线，收集第50‑80管，合并后经浓缩、透析、冷冻干燥得到大石花菜多糖A‑1；

(4)上述大石花菜多糖A‑1配置成浓度为50mg/mL的溶液，0.22μm滤膜过滤后，经Sephadex G‑100柱分离，上样量为5mL，用0.3mol/L NaCl溶液洗脱，自动部分收集器收集，流速为1mL/min，6分钟每管；采用苯酚‑硫酸法检测，以试管号为横坐标，吸光度为纵坐标绘制洗脱曲线，收集第5‑35管合并后经浓缩、透析、冷冻干燥分别得大石花菜纯多糖A‑11，即具有免疫调节作用的大石花菜多糖。

7.根据权利要求1‑6任一所述的制备方法制得的具有免疫调节作用的大石花菜多糖。

8.根据权利要求7所述的具有免疫调节作用的大石花菜多糖，其特征在于，所述的具有免疫调节作用的大石花菜多糖的平均相对分子量为28807Da，主要由木糖和半乳糖组成，以及痕量的鼠李糖、阿拉伯糖、岩藻糖、阿洛糖、果糖，葡萄糖和甘露糖。

9.根据权利要求7、8任一所述的具有免疫调节作用的大石花菜多糖在制备免疫调节剂中的应用。

10.根据权利要求7、8任一所述的具有免疫调节作用的大石花菜多糖在制备抗肿瘤的药物或食品中的应用。