[发明专利]一种细胞生长因子冻干粉、制备方法及应用

摘要

本发明提供一种细胞生长因子冻干粉、制备方法及应用，细胞生长因子冻干粉是由脐带间充质干细胞传代培养的细胞培养上清液进行冰冻后制备而成，并加入人血白蛋白作为保护剂。制备方法包括以下步骤：A:将脐带间充质干细胞进行分离;B:将脐带间充质干细胞加入培养基中进行传代培养;C:收集步骤B中脐带间充质干细胞培养上清液，加入甘露醇与人血白蛋白后先将细胞培养上清液抽至离心管中放置低温冰箱或者液氮罐中冻存至固态状，使培养基完全冰冻结实，将固态状的冰冻培养基放置冻存瓶中，然后上机冷冻干燥12‑24h制成冻干粉，并冷藏保存。加入人血白蛋白作为保护剂，不易引起过敏及其他排斥反应，更易吸收，对皮肤有抗氧化的功效，进一步延缓皮肤衰老。 1

主权项

1.一种细胞生长因子冻干粉，其特征在于，所述细胞生长因子冻干粉是由脐带间充质干细胞传代培养的细胞培养上清液进行冰冻后制备而成，并加入人血白蛋白作为保护剂。

2.一种细胞生长因子冻干粉制备方法，其特征在于，其包括以下步骤：

A: 将脐带间充质干细胞进行分离;

B: 将脐带间充质干细胞加入培养基中进行传代培养;

C: 收集步骤B中脐带间充质干细胞培养上清液，加入甘露醇与人血白蛋白后，先将细胞培养上清液抽至离心管中放置低温冰箱或者液氮罐中冻存至固态状，使培养基完全冰冻结实，将固态状的冰冻培养基放置冻存瓶中，然后上机冷冻干燥12‑24h制成冻干粉，并冷藏保存。

3.根据权利2所述一种细胞生长因子冻干粉制备方法，其特征在于，所述步骤A包括以下步骤:

A1：分离新鲜脐带血管周围的沃顿胶，剪碎；

A2：放入Ⅰ型胶原酶中，加入双抗和两性霉素B，混合均匀后置于培养箱中37℃过夜，取出后加入胰酶，再次置于培养箱中37℃，消化30min；

A3：消化后,用生理盐水稀释4~6倍后3000 rpm离心15~20min；

A4：离心后弃上清液，加入培养基混悬后转入培养皿中，每皿加添加剂，双抗和两性霉素B, 置培养箱中培养,根据培养状态进行换液，待细胞长满后传代培养。

4.根据权利2所述一种细胞生长因子冻干粉制备方法，其特征在于，所述步骤B包括以下步骤:

B1：细胞长满后进行传代，按1:（3~5）传代培养，吸取步骤A4中培养基至离心管；

B2:在离心管中加入生理盐水和浓度为0.05%胰酶，混匀消化，消化好后加入培养基终止消化;

B3：把消化好细胞洗下来收集到离心管中，1800 rpm离心5min；

B4：离心后弃上清，加入培养基（含添加剂）混悬，稀释后转入培养皿；

B5：放入培养箱中培养。

5.权利要求1所述一种细胞生长因子冻干粉在延缓皮肤衰老，促进胶原蛋白生长、补充皮肤水分、缩小皮肤毛孔以及淡化皮肤黑色素中的应用。

6.根据权利要求5所述一种细胞生长因子冻干粉的应用，其特征在于，所述冻干粉在使用时用溶酶溶解后使用。