[发明专利]一种以黄粱木茎段为外植体的高效再生方法

摘要

本发明公开了一种以黄粱木茎段为外植体的高效再生方法，包括如下步骤：S1：无菌苗的获得:将种子置于37℃‑40℃恒温摇床上震荡浸泡24‑36h；在无菌超净台上，用75％酒精灭菌30s，无菌水冲洗3次，10％NaClO溶液灭菌12‑15min，无菌水彻底冲洗6次，将种子播种培养；S2：茎段的伸长以及获得；S3：茎段的诱导及伸长；S4：生根培养；S5：炼苗及移栽。本发明的高效组织培养和植株再生方法，可摆脱外界条件的影响，规模化和工厂化生产出健壮、整齐一致的黄粱木组培幼苗；与已经报道的以下胚轴、带腋芽的茎段、萌芽条作为外植体构建再生体系相比，该方法不仅能满足市场对种苗的需求，并且可以通过转基因研究对黄粱木种质资源进行改良和创新，为黄粱木种质资源可持续利用奠定基础。

主权项

1.一种以黄粱木茎段为外植体的高效再生方法，其特征在于：包括如下步骤：S1：无菌苗的获得：将种子置于37℃‑40℃恒温摇床上震荡浸泡24‑36h；在无菌超净台上，用75％酒精灭菌30s，无菌水冲洗3次，10％NaClO溶液灭菌12‑15min，无菌水彻底冲洗6次，将种子播种培养；S2：茎段的伸长以及获得：种子培养7d开始萌芽，15‑25d后生长成无菌苗，把无菌苗切断接种培养，培养15‑28天后，切取茎段作为外植体；S3：茎段的诱导及伸长：将外植体诱导愈伤，接种时茎段垂直插入培养基；培养15‑25d后，茎段上开始由黄绿色愈伤变成绿色芽点时，将外植体诱导不定芽伸长；S4：生根培养：待不定芽伸长到3‑4cm时，切取不定芽进行诱导生根；S5：炼苗及移栽：生根培养20d后，不定芽长出多条根，将培养苗从培养瓶中挖出，洗净根上的培养基，将培养苗在自来水中浸泡2h，移栽到经灭菌的泥炭土上，在营养杯上套上塑料袋保湿，3d后慢慢地移开塑料袋，按生长需求浇水。