[发明专利]一种与叶酸代谢相关的基因分型的方法和试剂盒

摘要

本发明公开一种与叶酸代谢相关的基因分型的方法和试剂盒。该方法包括：扩增：使用PCR引物扩增样本DNA从而得到PCR产物，并对PCR产物进行纯化；所述PCR引物包括SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：6核苷酸序列；延伸：使用MTHFR的1298位点延伸引物SEQ ID NO：9、MTHFR的677位点延伸引物SEQ ID NO：10和MTRR的66位点延伸引物SEQ ID NO：11对上述纯化后的PCR产物进行单碱基延伸，并对延伸产物进行纯化；飞行质谱检测：将纯化后的延伸产物转移到质谱芯片上进行质谱检测。本发明技术方案实现了一个反应的多重检测，大大降低试剂成本和其他成本如人力、一次性耗材、实验室运营等，大大提高检测样本通量。 1

主权项

1.一种与叶酸代谢相关的基因分型的方法，其特征在于，包括以下步骤：

扩增：使用PCR引物扩增样本DNA从而得到PCR产物，并对PCR产物进行纯化；所述PCR引物包括SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：6核苷酸序列，其中，

SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2核苷酸序列配对使用，

SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4核苷酸序列配对使用，

SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6核苷酸序列配对使用；

延伸：使用MTHFR的1298位点延伸引物SEQ ID NO：9、MTHFR的677位点延伸引物SEQ ID NO：10和MTRR的66位点延伸引物SEQ ID NO：11对上述纯化后的PCR产物进行延伸，并对延伸产物进行纯化；

飞行质谱检测：将纯化后的延伸产物转移到质谱芯片上进行质谱检测。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述PCR引物还包括SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8和SEQ ID NO：12；其中，SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8核苷酸序列配对使用。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述PCR扩增条件为：

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述延伸反应条件为：

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述样本来自唾液或者口腔拭子。

6.如权利要求1的方法，其特征在于，对延伸产物进行纯化的步骤包括：

步骤一，树脂纯化：在每个反应孔中加入树脂，翻转摇匀；

步骤二，离心：将步骤一中的产品进行离心，以获得纯化后的产品。

7.一种试剂盒，其特征在于，包括SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2；SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4；SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6的引物对。

8.如权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，还包括SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：10和SEQ ID NO：11的引物。

9.如权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，还包括SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8的引物对、及SEQ ID NO：12的引物。

10.如权利要求7、8或9所述的试剂盒，其特征在于，还包括用于DNA纯化或单碱基延伸的试剂。