[发明专利]一种用于扩增重组犬腺病毒CAV2的稳定细胞系MDCK及其构建方法在审
| 申请号： | 201810095598.5 | 申请日： | 2018-01-31 |
| 公开（公告）号： | CN108342362A | 公开（公告）日： | 2018-07-31 |
| 发明（设计）人： | 潘杏;李良凤;高娟;杨甜;黄晓苹 | 申请（专利权）人： | 武汉枢密脑科学技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N15/867;C12N7/00;C12N15/65;C12R1/91 |
| 代理公司： | 武汉东喻专利代理事务所(普通合伙) 42224 | 代理人： | 纪元 |
| 地址： | 430000 湖北省武汉*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种表达犬腺病毒E1A基因和E1B基因的稳定细胞系、其构建方法和应用，通过将E1区的两个基因E1A和E1B分别构建到慢病毒载体中，然后让MDCK细胞分别稳定的表达E1A和E1B基因，构建了MDCK‑E1A‑E1B的稳定细胞系。本发明将片段较长不易构建的E1基因拆成了两段片段较短易于构建的E1A和E1B基因，提高了构建稳定细胞的成功率；E1A和E1B基因分别带有不同颜色的荧光蛋白，便于实时监控稳定细胞的稳定性。实验证明MDCK‑E1A‑E1B稳定细胞系比MDCK‑E1稳定细胞系扩增犬腺病毒滴度更高，为犬腺病毒在病毒活载体疫苗、基因治疗、癌症治疗等领域的应用上奠定了很好的基础。 | ||
| 搜索关键词： | 构建 稳定细胞系 犬腺病毒 稳定细胞 扩增 病毒活载体疫苗 慢病毒载体 癌症治疗 基因治疗 实时监控 荧光蛋白 滴度 两段 成功率 应用 基因 | ||
【主权项】：
1.一种用于表达犬腺病毒E1A基因和E1B基因的稳定细胞系，其特征在于，所述稳定细胞系为MDCK细胞，其以慢病毒作为载体，在所述MDCK细胞的基因组中先后随机插入E1A基因和E1B基因，所述E1A基因和E1B基因均来源于犬腺病毒CAV2；该稳定细胞系能够分别表达所述E1A基因和所述E1B基因。
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