[发明专利]一种pH分辨比色生物传感器构建的方法

摘要

本发明属于比色生物传感器构建领域，提供了一种pH分辨比色生物传感器构建的方法，技术方案为：步骤1、四氧化三铁纳米颗粒与氧化石墨烯复合物(Fe3O4/GO)制备；步骤2、pH分辨比色生物传感器构建。本发明构建的pH分辨比色生物传感器能够为多目标检测提供了一种简单，快速，准确和低成本的策略。

主权项

1.一种pH分辨比色生物传感器构建的方法，其特征在于，步骤如下：步骤1、制备四氧化三铁纳米颗粒与氧化石墨烯复合物(Fe3O4/GO)，备用；步骤2、pH分辨比色生物传感器构建：步骤2a、移取氧化石墨烯(GO)水溶液，超声2‑4h；加入溶有DNA1的磷酸盐缓冲溶液，振荡22‑24h，离心并用pH值为7.4的磷酸盐缓冲液洗涤数次；加入pH值为7.4的磷酸盐缓冲液和酚酞(PP)的乙醇溶液，振荡2～3h；离心并用pH值为7.4的磷酸盐缓冲液洗涤三次，得到PP‑DNA1‑GO，加入和氧化石墨烯水溶液等体积的pH值为7.4的磷酸盐缓冲液保存于2～4℃下备用；用孔雀石绿MGCB替代步骤2a的PP，用DNA3替代步骤2a的DNA1，反应条件和步骤2a一致；得到MGCB‑DNA3‑GO；用百里酚酞TP替代步骤2a的PP，用DNA5替代步骤2a的DNA1，反应条件和步骤2a一致；得到TP‑DNA5‑GO；用甲基紫MV替代步骤2a的PP，用DNA7替代步骤2a的DNA1，反应条件和步骤2a一致；得到MV‑DNA7‑GO；步骤2b、同时移取步骤1制备的Fe3O4/GO溶液，加入溶有DNA2的磷酸盐缓冲溶液溶液，振荡22‑24h，离心并用pH值为7.4的磷酸盐缓冲液洗涤数次，得到DNA2‑Fe3O4/GO，加入和Fe3O4/GO溶液等体积的pH值为7.4的磷酸盐缓冲液保存于2～4℃下备用；用DNA4替代步骤2b的DNA2，条件和步骤2b一致，得到DNA4‑Fe3O4/GO；用DNA6替代步骤2b的DNA2，条件和步骤2b一致，得到DNA6‑Fe3O4/GO；用DNA8替代步骤2b的DNA2，条件和步骤2b一致，得到DNA8‑Fe3O4/GO；步骤2c、按体积比1:1移取PP‑DNA1‑GO和DNA2‑Fe3O4/GO混合得混合液一，接着加入目标物赭曲霉素A适配体(OTA aptamer)振荡10‑12h，磁分离并用pH值为7.4的磷酸盐缓冲液洗涤数次，得到PP‑DNA1‑GO‑OTA aptamer‑DNA2‑Fe3O4/GO，加入和混合液一等体积的pH值为7.4的磷酸盐缓冲液保存于2～4℃下备用；同时按体积比1:1移取MGCB‑DNA3‑GO和DNA4‑Fe3O4/GO混合得混合液二，接着加入目标物黄曲霉毒素B1适配体(AFB1 aptamer)振荡10‑12h，磁分离并用pH值为7.4的磷酸盐缓冲液洗涤数次，得到MGCB‑DNA3‑GO‑AFB1 aptamer‑DNA4‑Fe3O4/GO，加入和混合液二等体积的pH值为7.4的磷酸盐缓冲液保存于2～4℃下备用；同时按体积比1:1移取TP‑DNA5‑GO和DNA6‑Fe3O4/GO混合得混合液三，接着加入目标物伏马菌素B1适配体(FB1 aptamer)振荡10‑12h，磁分离并用pH值为7.4的磷酸盐缓冲液洗涤数次，得到TP‑DNA5‑GO‑FB1 aptamer‑DNA6‑Fe3O4/GO，加入和混合液三等体积的pH值为7.4的磷酸盐缓冲液保存于2～4℃下备用；同时按体积比1:1移取MV‑DNA7‑GO和DNA8‑Fe3O4/GO混合得混合液四，接着加入目标物微囊藻毒素LR适配体(MC‑LR aptamer)振荡10‑12h，磁分离并用pH值为7.4的磷酸盐缓冲液洗涤数次，得到MV‑DNA7‑GO‑MC‑LR aptamer‑DNA8‑Fe3O4/GO，加入和混合液四等体积的pH值为7.4的磷酸盐缓冲液保存于2～4℃下备用；步骤2d、分别移取步骤2c中的PP‑DNA1‑GO‑OTA aptamer‑DNA2‑Fe3O4/GO，MGCB‑DNA3‑GO‑AFB1 aptamer‑DNA4‑Fe3O4/G，TP‑DNA5‑GO‑FB1 aptamer‑DNA6‑Fe3O4/GO，MV‑DNA7‑GO‑MC‑LR aptamer‑DNA8‑Fe3O4/GO的溶液混合，磁分离移去上清液；接着分别对应滴加浓度从5ng/mL到500ng/mL的目标物赭曲霉素A(OTA)，黄曲霉毒素B1(AFB1)，伏马菌素B1(FB1)和微囊藻毒素LR(MC‑LR)的混合液，磁分离后通过改变上清液和沉淀物的pH值按浓度进行比色分析。