[发明专利]一种利用菜籽粕固态发酵制备环脂肽的方法

摘要

本发明公开一种利用菜籽粕固态发酵制备环脂肽的方法，属于生物技术领域。以菜籽饼粕为原料，添加适量的废糖蜜、无机盐溶液及水制备成固态培养基混合物，向混合物中接入一定比例的甲基营养型芽胞杆菌(Bacillus methylotrophicus)发酵种子液，于一定温度下进行发酵。发酵结束后，发酵产物经过溶剂浸提、调节溶液酸碱性、离心等纯化过程后进行冷冻干燥制得环脂肽产品。本发明利用油脂及蔗糖加工过程中产生的废弃物生产环脂肽，能够降低环脂肽的生产成本。

主权项

1.一种利用菜籽粕固态发酵制备环脂肽的方法，按照下述步骤进行：(1)将甲基营养型芽胞杆菌(Bacillus methylotrophicus)用种子培养基进行扩大培养，种子培养基的组成：蛋白胨5.0g，牛肉浸取物3.0g，NaCl 5.0g，琼脂15.0g，蒸馏水1.0L，pH 7.0；按照体积比为2～5％的比例接种活化后的甲基营养型芽胞杆菌(Bacillus methylotrophicus)，在25～32℃及180rpm条件下培养10小时；(2)甲基营养型芽胞杆菌(Bacillus methylotrophicus)固态发酵菜籽粕：菜籽粕5～25g，分别加入占菜籽粕质量比为5～15％的废糖蜜及10％的无机盐溶液，然后加入与菜籽粕质量体积比为1:1的水；按照菜籽粕质量体积比为2～10％(v/w)的比例接入步骤(1)中扩大培养后的种子液，于25～32℃发酵24～48h；(3)发酵结束后，添加菜籽粕质量的5～15倍的去离子水浸泡半小时，并逐步添加6mol/L氢氧化钠，将浸提液pH调节至8.0，离心除去菌体，收集上清液；在上清液中缓慢加入6mol/L盐酸，调节pH至2.0，静置30min后离心，收集沉淀；沉淀用0.1mol/L NaNO3洗涤3次，再用去离子水洗涤3次，离心收集沉淀；冷冻干燥，制得环脂肽成品。