[发明专利]一种毛白杨胚囊的分离方法

摘要

利用酶解‑解剖法结合吸吹的方法，从新鲜毛白杨胚珠中分离得到了完整的胚囊，获得率高达8.7%；同时筛选出分离毛白杨胚珠的混合酶液成分包括半纤维素酶、纤维素酶、果胶酶、甘露醇、BSA，酶解处理后经过醋酸洋红染色和透明处理，在倒置显微镜下观察，看到了完整清楚的毛白杨胚囊的形态与内部结构，呈长椭圆形，大小为2.52µm左右，单珠被，5‑6层珠心细胞，珠孔端有卵器细胞存在，合点端有类似反足细胞的结构。该技术方案同样可应用于长寿花的胚囊分离中。

主权项

1.一种毛白杨胚囊的分离方法，其特征在于，（1）取材，取毛白杨雌花序中部开花未授粉、授粉后1‑2d的小花；（2）胚珠的收集与酶解，去掉毛白杨雌花的苞片，在解剖镜下从子房中剥出胚珠，置于混合酶液中，振荡、酶解1‑3h后，在Olympus CKX41倒置显微镜下观察胚珠酶解过程，在不含酶液的分离液中分离出胚囊；（3）染色与透明，对分离出的胚珠和胚囊进行染色或透明处理，所述的染色处理的染色液为1–2%醋酸洋红；透明处理是将毛白杨花序用卡诺固定液常温固定24h后，放于质量浓度为70‑80%的酒精中保存；再依次用质量浓度为40‑60%、20‑30%，0%的酒精溶液冲洗；加入0.5‑2M氢氧化钠溶液50‑70℃处理30min，冷却后用清水冲洗；剖开蒴果取出胚珠放入质量浓度为5‑15%次氯酸钠溶液中真空浸透1‑2h。