[发明专利]一种三价卵黄抗体口服液的制备方法

摘要

本发明公开了一种三价卵黄抗体口服液的制备方法，将初步制备得到的卵黄抗体水溶液进行微孔过滤，依次加入pH6.6的PBS液和硫柳汞，其中卵黄抗体水溶液：PBS液：硫柳汞的体积比为（0.7‑0.9）：（0.04‑0.06）：（0.001‑0.002），混匀，用蜡密封，置于4℃冷藏保存，即得。本发明方法制备的初制卵黄抗体纯度能够达到85%，相较于现有方法，纯度得到了显著的提高；经氯仿‑甲醇体系处理后可以很大程度上保证卵黄抗体的生物活性，对于小鹅瘟、番鸭细小、鸭大舌病特异性强，易于市场推广。

主权项

1.一种三价卵黄抗体口服液的制备方法，其特征在于，步骤如下：（1）选取无特定病原体蛋鸡在洁净养殖场隔离饲养，对蛋鸡进行3次免疫，每次给每只鸡注射小鹅瘟、番鸭细小、鸭大舌病三价疫苗注射剂量分别为（0.6‑0.8mL）、（1.0‑1.4mL）、 （2.2‑2.6mL），每次间隔15天；（2）完成第3次免疫21天后，收集鸡蛋，对卵黄中的卵黄抗体进行免疫学检测，小鹅瘟、番鸭细小、鸭大舌病的卵黄抗体琼脂扩散效价达到1:16以上的鸡蛋为小鹅瘟、番鸭细小、鸭大舌病病毒高免鸡蛋，收集贮存在16℃条件下备用；（3）将步骤（2）所得高免蛋用0.2%的碘液消毒10min，打碎，取出卵黄，加入卵黄重量6‑8倍的蒸馏水，并调整pH值至5.2‑5.8，搅拌15‑25分钟，在6℃条件下，静置8‑14小时，调整离心机转速为3000‑4000r/min，离心10‑20分钟，取上清液，备用；（4）将步骤（3）所得上清液加入灭菌的容器中，用无菌生理盐水稀释0.5‑0.8倍，再加入与上清液等体积的氯仿‑甲醇混合溶液，其中氯仿和甲醇的体积比为10:1，充分震荡后，于28‑36℃水浴40‑60分钟，其间搅拌3‑5次，取出，于1500‑2500r/min转速下离心25‑35分钟，样品分三层，最上层溶液为卵黄抗体水溶液，取出，备用；（5）将卵黄抗体水溶液进行微孔过滤，然后依次加入pH6.6的PBS液和硫柳汞，其中卵黄抗体水溶液：PBS液：硫柳汞的体积比为（0.7‑0.9）：（0.04‑0.06）：（0.001‑0.002），混匀，用蜡密封，置于4℃冷藏保存，即得。