[发明专利]基于pOp/LhG二元表达系统的外源基因清除技术基础载体及其制备方法和应用在审
| 申请号： | 201810125980.6 | 申请日： | 2018-02-08 |
| 公开（公告）号： | CN108300734A | 公开（公告）日： | 2018-07-20 |
| 发明（设计）人： | 赵德刚;丁静;盖钧镒;李义;翟新秘;吴寒 | 申请（专利权）人： | 贵州大学;南京农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82;A01H1/02;A01H5/00;A01H6/46 |
| 代理公司： | 南京天华专利代理有限责任公司 32218 | 代理人： | 徐冬涛 |
| 地址： | 550025 *** | 国省代码： | 贵州;52 |
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| 摘要： | 本发明提供一种基于pOp/LhG二元表达系统的外源基因清除技术基础载体及其制备方法和应用。针对原本只能应用于无性繁殖作物的外源基因清除技术，改进外源基因清除技术的基础载体，采用效应载体与激活载体组成的双载体形式，将效应载体和激活载体分别作用于不同亲本。效应载体包括标记基因表达框1、重组酶识别序列和重组酶表达框；激活载体包括标记基因表达框2、重组酶识别序列和激活表达框；分别含有效应载体的和含有激活载体的两亲本杂交时，实现特定组织和/或时期中将全部外源基因的清除，使该技术能够应用于有性繁殖作物中的异交繁殖作物，生物安全性高，具有良好的研究和应用前景。 | ||
| 搜索关键词： | 外源基因 激活 标记基因表达框 制备方法和应用 重组酶识别序列 表达系统 技术基础 表达框 无性繁殖 生物安全性 研究和应用 基础载体 亲本杂交 载体形式 性繁殖 重组酶 亲本 异交 应用 繁殖 改进 | ||
【主权项】：
1.一种基于pOp/LhG二元表达系统的外源基因清除技术基础载体，其特征在于，所述外源基因清除技术基础载体包含效应载体和激活载体；所述效应载体包括重组酶表达框、标记基因表达框1、重组酶识别序列；所述重组酶表达框包括pOp/LhG二元表达系统中的人工启动子pOp、重组酶FLP基因和NOS终止子，重组酶表达框序列如SEQ ID NO.1所示；所述标记基因表达框1包括Ubi启动子、Bar‑GUS融合基因、35S终止子，标记基因表达框1序列如SEQ ID NO.2所示；所述重组酶识别序列包括LB loxP‑FRT(SEQ ID NO.3)和RB loxP‑FRT(SEQ ID NO.4)；所述激活载体包括激活表达框、标记基因表达框2、重组酶识别序列；所述激活表达框包括pOp/LhG二元表达系统中的转录激活子LhG4基因、NOS终止子，激活表达框序列如SEQ ID NO.6所示；所述标记基因表达框2包括35S启动子、GUS‑NPTII融合基因、35S终止子，标记基因表达框2序列如SEQ ID NO.7所示；所述重组酶识别序列与效应载体的相同，包括LB loxP‑FRT(SEQ ID NO.3)和RB loxP‑FRT(SEQ ID NO.4)；所述效应载体和激活载体分别整合在不同的载体pCAMBIA0380上，载体pCAMBIA0380序列如SEQ ID NO.5所示。
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