[发明专利]一种冻存细胞复苏的方法在审
| 申请号： | 201810128819.4 | 申请日： | 2018-02-08 |
| 公开（公告）号： | CN108330098A | 公开（公告）日： | 2018-07-27 |
| 发明（设计）人： | 李杰;刘振云;徐华栋;王维;程丰伟 | 申请（专利权）人： | 安徽古一生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/07 | 分类号： | C12N5/07 |
| 代理公司： | 合肥市浩智运专利代理事务所(普通合伙) 34124 | 代理人： | 施兴华 |
| 地址： | 238000 安徽省合肥*** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | 本发明提供一种冻存细胞复苏的方法，包括以下步骤：(1)清洗液的准备：准备第一离心管，加入DMEM无血清培养基和胎牛血清(FBS)，混匀后，放入水浴锅中预热；(2)冻存细胞的融化：从液氮中迅速取出细胞冻存管，迅速转移至水浴锅中使完全融化；(3)转移：将细胞冷冻液从冻存管中吸出，转移至第二离心管中，然后吸取适量清洗液逐滴加入到细胞冷冻液中，前期每次一滴，轻摇管身，使清洗液缓慢融入冷冻液中，加入1‑2ml清洗液后，可逐渐加快加液速度；(4)离心：将加入清洗液后的细胞冷冻液进行离心；(5)孵育：转移至T‑175培养瓶，温度为35‑40℃，CO2为3‑7％环境下孵育。本发明的优点在于：显著提高细胞的活率。 | ||
| 搜索关键词： | 清洗液 细胞冷冻液 冻存 细胞复苏 离心管 水浴锅 孵育 融化 无血清培养基 细胞 胎牛血清 细胞冻存 冻存管 冷冻液 培养瓶 预热 放入 管身 混匀 加液 吸出 液氮 取出 融入 | ||
【主权项】：
1.一种冻存细胞复苏的方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)清洗液的准备：准备第一离心管，加入10ml的改良杜氏伊格尔培养基无血清培养基，加入10‑30％胎牛血清，上下颠倒混匀后，放入水浴锅中预热；(2)冻存细胞的融化：从液氮中迅速取出细胞冻存管，在30‑60s内转移至水浴锅中，2次/s晃动冻存管，控制1min内细胞完全融化；(3)转移：准备第二离心管，将细胞冷冻液从冻存管中吸出，转移至第二离心管中，然后吸取所有的清洗液逐渐加入到细胞冷冻液中，前期每次一滴，轻摇管身，使清洗液缓慢融入冷冻液中，加入1‑2ml清洗液后，逐渐加快加液速度；(4)离心：将加入清洗液后的细胞冷冻液进行离心；(5)孵育：离心结束后，取出第二离心管，倒净上清，转移至T‑175培养瓶，温度为35‑40℃，CO2为3‑7％环境下孵育。
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