[发明专利]一种去除无细胞百日咳组分疫苗中内毒素的方法在审
| 申请号： | 201810131774.6 | 申请日： | 2018-02-09 |
| 公开（公告）号： | CN108676829A | 公开（公告）日： | 2018-10-19 |
| 发明（设计）人： | 孙明波;梁疆莉;高娜;顾琴;姬秋彦;马艳;李琦涵;史茘;杨净思;姚宇峰;杨晓蕾;车艳春;衡燮;和占龙;赵刚 | 申请（专利权）人： | 中国医学科学院医学生物学研究所 |
| 主分类号： | C12P21/00 | 分类号： | C12P21/00;C07K1/18;C07K1/14;C12R1/01 |
| 代理公司： | 北京国林贸知识产权代理有限公司 11001 | 代理人： | 郑俊彦;许文娟 |
| 地址： | 650118 云*** | 国省代码： | 云南;53 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种去除无细胞百日咳组分疫苗中内毒素的方法，所述方法利用新型复合型阴离子层析填料Capto adhere，通过层析纯化去除百日咳毒素(Pertussistoxin，PT)和丝状血凝素(Filamentous hemagglutinin，FHA)中的内毒素。所述方法可以在不带入外源物质的前提下，保持有效成分PT和FHA生物活性和回收率的同时，将PT和FHA中的内毒素去除至100 EU/mg以下。所述填料Capto adhere在处理样品时要求缓冲液的电导范围较广，减少了缓冲液置换的过程。相对于其它方法而言，在大批量制备PT和FHA时，使用Capto adhere层析介质去除内毒素是一种合理且高效的方法。 | ||
| 搜索关键词： | 内毒素 去除 组分疫苗 百日咳 缓冲液 无细胞 百日咳毒素 内毒素去除 丝状血凝素 层析介质 生物活性 外源物质 阴离子层 通过层 电导 回收率 制备 置换 | ||
【主权项】：
1.一种去除无细胞百日咳组分疫苗中内毒素的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：1）将百日咳杆菌发酵液离心，收集上清液经0.45μm滤膜过滤，再经超滤浓缩得到发酵上清，用含尿素的磷酸平衡缓冲液调节发酵上清的pH和电导，调整后样品上样于Capto SP ImpRes柱中，洗脱并分别收集PT组分和FHA组分；2）将步骤1）得到的PT组分继续上样于Capto MMC柱，洗脱得到进一步纯化后的PT组分；3）用含尿素的磷酸平衡缓冲液调节步骤2）收集的进一步纯化后的PT组分和步骤1）收集的FHA组分的pH和电导，而后分别上样于Captoadhere柱中洗脱，通过层析纯化去除内毒素，收集样品穿透峰，即得到目的蛋白PT和FHA。
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