[发明专利]鸡TBK1基因的小干扰RNA质粒的构建方法及用途有效
| 申请号： | 201810136202.7 | 申请日： | 2018-02-09 |
| 公开（公告）号： | CN108384804B | 公开（公告）日： | 2021-03-09 |
| 发明（设计）人： | 孙建和;程玉强;朱雯娴;严亚贤 | 申请（专利权）人： | 上海交通大学 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/113;C12N5/10 |
| 代理公司： | 上海汉声知识产权代理有限公司 31236 | 代理人： | 庄文莉 |
| 地址： | 200240 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种鸡TBK1基因的小干扰RNA质粒的构建方法，所述构建方法包括如下步骤：S1、设计针对鸡TBK1的两条干扰靶序列；S2、根据步骤S1设计的两条干扰靶序列，分别合成用于构建shRNA片段的两组互补的单链DNA序列，并分别在所述两组互补的单链DNA序列中引入相应的酶切位点；S3、将所述两组互补的单链DNA序列分别经变性退火后，分别形成带有黏末端的双链DNA片段；然后，分别将所述双链DNA片段与载体连接，得到所述鸡TBK1基因的小干扰RNA。我们通过细胞水平实验，证实本发明构建的靶向鸡TBK1小干扰RNA的干扰质粒能高效特异性抑制鸡TBK1基因的表达，为深入研究TBK1在鸡抗病毒先天免疫中的作用提供了平台。 | ||
| 搜索关键词： | tbk1 基因 干扰 rna 质粒 构建 方法 用途 | ||
【主权项】：
1.一种鸡TBK1基因的小干扰RNA质粒的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括如下步骤：S1、设计针对鸡TBK1的两条干扰RNA靶序列；S2、根据步骤S1设计的两条干扰RNA靶序列，分别合成用于构建shRNA片段的两组互补的单链DNA序列，并分别在所述两组互补的单链DNA序列中引入相应的酶切位点；S3、将所述两组互补的单链DNA序列分别经变性退火后，分别形成带有黏末端的双链DNA片段；然后，分别将所述双链DNA片段与载体连接，得到所述鸡TBK1基因的小干扰RNA质粒。
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