[发明专利]一种兰瑞肽的固相合成方法

摘要

本发明涉及一种兰瑞肽的固相合成方法，解决了现有技术液相合成方法反应步骤繁琐、反应时间长、溶剂用量大，分离纯化难的技术问题。本发明提供了一种兰瑞肽的固相合成方法，以Fmoc‑氨基树脂为固相合成的载体，依次缩合8个保护氨基酸，得到兰瑞肽的前体线性肽树脂，然后进行二硫键环化反应，得到兰瑞肽肽树脂，采用固相氧化的方式进行形成二硫键的环化反应，最后将肽树脂裂解、脱去侧链保护基，得兰瑞肽粗品，纯化得兰瑞肽纯品。本发明广泛应用于多肽药物制备技术领域。

主权项

1.一种兰瑞肽的固相合成方法，其特征在于，包括步骤如下：1)缩合反应：在缩合体系中，以Fmoc氨基树脂为固相合成的载体，树脂经溶胀、脱去Fmoc保护基和洗涤后，依次从C端至N端缩合连接8个经活化的、含有侧链保护基的Fmoc‑氨基酸，得N端氨基含有Fmoc保护基的全保护线性肽树脂Fmoc‑D‑2‑Nal‑Cys(Trt)‑Tyr(tBu)‑D‑Trp(Boc)‑Lys(Boc)‑Val‑Cys(Trt)‑Thr(OtBu)‑氨基树脂；所述依次缩合的保护氨基酸顺序为：Fmoc‑Thr(OtBu)‑OH、Fmoc‑Cys(Trt)‑OH、Fmoc‑Val‑OH、Fmoc‑Lys(Boc)‑OH、Fmoc‑D‑Trp(Boc)‑OH、Fmoc‑Tyr(tBu)‑OH、Fmoc‑Cys(Trt)‑OH、Fmoc‑D‑2‑Nal‑OH；所述缩合体系为：A+D或A+B+C，其中A为HOBT或HOAT，B为HATU、HBTU、TBTU或PyBOP其中任何一种，C为DIEA或TMP，D为DIC；2)加入I2含量为8 eq的1,4‑二氧六环溶液，在10～30 ℃条件下反应1～5 h，对步骤1)制得的全保护线性肽树脂进行环化后，分别用四氯化碳和DMF洗涤树脂，得环肽树脂；3)脱除步骤2)制得的环肽树脂N端D‑2‑Nal氨基上的Fmoc保护基，得N端氨基裸露的环肽树脂；4)脱除步骤3)制得的N端氨基裸露的环肽树脂的侧链保护基，并切割树脂，得兰瑞肽粗肽；5)对步骤4)制得的兰瑞肽粗肽进行纯化、冻干，得兰瑞肽纯品。