[发明专利]一种筛查正清风痛宁制剂中潜在致敏组分的方法

摘要

本发明公开了一种筛查正清风痛宁制剂中潜在致敏组分的方法，该方法包括构建细胞膜色谱‑‑CMC2、构建CMC‑HPLC/MS系统的具体步骤；正清风痛宁制剂原料或注射剂样品进入CMC系统，致敏组分，会与肥大细胞膜结合，被CMC系统识别并将出峰，其根据其在细胞膜上保留的时间对其保留组分进行接液，接液浓缩；将所得的浓缩液作为新的样品，进入HPLC/MS系统进行化学结构检测，对HPLC/MS分析中的ESI‑MS图谱进行分析，根据其分子离子峰可以判断出浓缩液中的化学成分，即为致敏组分。本发明建立了高效、灵敏的正清风痛宁制剂药物类过敏组分的筛查方法，提高了致敏组分筛选准确率。

主权项

1.一种筛查正清风痛宁制剂中潜在致敏组分的方法，该方法包括如下步骤：构建细胞膜色谱—CMC：1.1)选择MrgXs受体类型细胞LAD2，RPMC，MPMC，MrgX2‑HEK293，MrgX3‑HEK293五种，将MRGPRX2受体高表达的细胞悬液于2‑6℃，离心，得沉淀为细胞；加入生理盐水清洗，重复1‑3次；细胞用2‑6℃冰浴超声，并细胞破碎4‑8次；然后悬浮液于2‑6℃，离心；吸取上清液；再次于2‑6℃，离心，吸弃上清液，得到细胞沉淀；细胞沉淀加入生理盐水，得到细胞膜溶液；1.2)取硅胶，活化；活化硅胶在室温下抽真空冷却至不烫；再于冰上，抽真空冷却；在抽真空状态下，将1.1)制备的细胞膜溶液与活化硅胶混合至均匀；2‑6℃条件下磁力震荡，吸出磁子后静置过夜；然后在2‑6℃下，离心，弃上清液；生理盐水清洗沉淀，重复1‑3次；得到硅胶细胞膜混悬液；细胞膜色谱柱装柱中加入1.2)所制备硅胶细胞膜混悬液，然后用三蒸水补满色谱柱；以超纯水为流动相，将压力稳定到6～12Mpa后，色谱柱下端有液体滴落时开始计时，计时2‑10min，即装填好细胞膜固定相。构建CMC‑HPLC/MS系统：将装填好细胞膜固定相的柱芯装入不锈钢柱套中，装入液相色谱仪中，以纯水为流动相，构成CMC系统；样品进入CMC系统等度洗脱，样品中存在的致敏组分，会与肥大细胞膜结合，被CMC系统识别并将出峰，其余组分则被洗脱；致敏组分在细胞膜上有保留，根据其在细胞膜上保留的时间对其保留组分进行接液，接液8‑15次后将所得的溶液浓缩；将所得的浓缩液作为新的样品，进入HPLC/MS系统进行化学结构检测，对HPLC/MS分析中的ESI‑MS图谱进行分析，根据其分子离子峰判断出浓缩液中的化学成分，即为致敏组分。