[发明专利]一种麦芽寡糖基海藻糖水解酶突变体及其应用有效
| 申请号： | 201810145937.6 | 申请日： | 2018-02-12 |
| 公开（公告）号： | CN108103046B | 公开（公告）日： | 2020-02-14 |
| 发明（设计）人： | 吴敬;宿玲恰;王振栋 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N9/24 | 分类号： | C12N9/24;C12N15/56;C12N15/70;C12P19/14;C12P19/12;C12R1/19 |
| 代理公司： | 23211 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 | 代理人： | 张勇 |
| 地址： | 214122 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种麦芽寡糖基海藻糖水解酶突变体及其应用，属于基因工程和酶工程技术领域。本发明提供了一系列麦芽寡糖基海藻糖水解酶突变体，应用于制备海藻糖，具有比较好的效果。本发明还将麦芽寡糖基海藻糖水解酶突变体在E.coli BL21(DE3)中进行了表达、发酵优化酶，可显著提高酶的产量。 | ||
| 搜索关键词： | 麦芽寡糖基海藻糖水解酶 突变体 应用 酶工程技术 基因工程 海藻糖 制备 发酵 优化 | ||
【主权项】：
1.一种麦芽寡糖基海藻糖水解酶的突变体，其特征在于，所述突变体是将氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的麦芽寡糖基海藻糖水解酶的第140位置的甲硫氨酸(Met)变成亮氨酸(Leu)，突变体命名为M140L；/n或，所述突变体是将氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的麦芽寡糖基海藻糖水解酶的第202位置的亮氨酸(Leu)变成脯氨酸(Pro)，突变体命名为L202P；/n或，所述突变体是将氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的麦芽寡糖基海藻糖水解酶的第218位置的亮氨酸(Leu)变成天冬氨酸(Asp)，突变体命名为L218D；/n或，所述突变体是将氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的麦芽寡糖基海藻糖水解酶的第323位置的酪氨酸(Tyr)变成甘氨酸(Gly)，突变体命名为Y323G；/n或，所述突变体是将氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的麦芽寡糖基海藻糖水解酶的第338位置的苯丙氨酸(Phe)变成丝氨酸(Ser)，突变体命名为F338S；/n或，所述突变体是将氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的麦芽寡糖基海藻糖水解酶的第202位置的亮氨酸(Leu)变成脯氨酸(Pro)，同时第323位置的酪氨酸(Tyr)变成甘氨酸(Gly)，得到L202P/Y323G；/n或，所述突变体是将氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的麦芽寡糖基海藻糖水解酶的第202位置的亮氨酸(Leu)变成脯氨酸(Pro)，第218位置的亮氨酸(Leu)变成天冬氨酸(Asp)，同时第323位置的酪氨酸(Tyr)变成甘氨酸(Gly)，得到L202P/L218D/Y323G；/n或，所述突变体是将氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的麦芽寡糖基海藻糖水解酶的第140位置的甲硫氨酸(Met)变成亮氨酸(Leu)，第202位置的亮氨酸(Leu)变成脯氨酸(Pro)，第218位置的亮氨酸(Leu)变成天冬氨酸(Asp)，同时第323位置的酪氨酸(Tyr)变成甘氨酸(Gly)，得到M140L/L202P/L218D/Y323G；/n或，所述突变体是将氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的麦芽寡糖基海藻糖水解酶的第140位置的甲硫氨酸(Met)变成亮氨酸(Leu)，第202位置的亮氨酸(Leu)变成脯氨酸(Pro)，第218位置的亮氨酸(Leu)变成天冬氨酸(Asp)，第323位置的酪氨酸(Tyr)变成甘氨酸(Gly)，同时第338位置的苯丙氨酸(Phe)变成丝氨酸(Ser)，得到M140L/L202P/L218D/Y323G/F338S；/n或，所述突变体是将氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的麦芽寡糖基海藻糖水解酶的第140位置的甲硫氨酸(Met)变成亮氨酸(Leu)，第202位置的亮氨酸(Leu)变成脯氨酸(Pro)，第218位置的亮氨酸(Leu)变成天冬氨酸(Asp)，第323位置的酪氨酸(Tyr)变成甘氨酸(Gly)，第338位置的苯丙氨酸(Phe)变成丝氨酸(Ser)，同时第404位置的异亮氨酸(Ile)变成苏氨酸(Thr)，得到M140L/L202P/L218D/Y323G/F338S/I404T。/n
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