[发明专利]一种口蹄疫病毒3B蛋白抗体的ELISA检测方法及试剂盒

摘要

本发明公开了一种口蹄疫病毒3B蛋白抗体的ELISA检测方法及试剂盒，该试剂盒包括3B蛋白包被的检测板、工作浓度的兔抗牛HRP酶标抗体、阴性对照、阳性对照、TMB显色液、1N盐酸。本发明可准确、快速检测出动物血清中3B抗体有无，用于检测动物血清中口蹄疫病毒非结构蛋白3B抗体，适用于动物群体感染状况监测和评估、发现早期隐性感染和进出境检疫，不受血清型的限制。

主权项

1.一种口蹄疫病毒3B蛋白抗体的ELISA检测方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、以含O型Akesu/58‑2毒株3B基因的pCAGGS‑3B质粒为模板,扩增3B蛋白基因,并克隆至pET‑30a(+)载体,进行原核表达及纯化；分别以Akesu/58‑2型口蹄疫病毒、纯化的3B蛋白为抗原；步骤2、将3B标准蛋白用0.05mol/l pH9.5的碳酸盐溶液CBS稀释成1.5mg/ml,4℃16h包被酶标板,封闭液为含1%明胶;根据待测样品数量取出所需酶标板并标记对照孔和样品孔,样品孔加入工作浓度的兔抗牛HRP酶标抗体和待测病毒培养液各100ul，对照孔加PBST，4℃孵育24h后移入酶标板上相应的孔中,37℃孵育45min后用PBST洗3次;步骤3、每个样品孔加入工作浓度的酶标二抗, 37℃孵育45min,PBST洗5次后加入底物,室温反应10min,加入终止液终止反应；用酶标仪读取各孔OD值;结果判定,根据各样品的B/Bo在标准曲线上求出其对应的质量浓度,或代入回归方程计算样品质量浓度的对数值X,求其反对数,即为样品中所含3B蛋白的质量浓度。