[发明专利]提高α-凝集素锚定酿酒酵母表面展示α-半乳糖苷酶表达活性及稳定性的方法

摘要

本发明涉及提高α‑凝集素锚定酿酒酵母表面展示α‑半乳糖苷酶表达活性及稳定性的方法。属于酶工程技术领域。α‑半乳糖苷酶通过α‑凝集素锚定在酿酒酵母细胞表面进行展示表达，并通过于含半乳糖的YNB‑CAA培养基中，或于pH5的McIlvaine缓冲液中，添加抗坏血酸，从而对表面展示α‑半乳糖苷酶的活性表达及稳定性提高具有显著作用。采用本发明的方法在酿酒酵母表面展示的α‑半乳糖苷酶，其酶活力最高可达1364.2U/g(dry cell)，为对照组的53.29倍，储存90天后具有良好稳定性，酶活力是1349.7U/g(dry cell)，稳定性最高是对照组的60.74倍。大幅提高了α‑半乳糖苷酶在工业生产中的应用性。

主权项

1.提高a‑凝集素锚定酿酒酵母表面展示α‑半乳糖苷酶表达活性及稳定性的方法，其特征在于，包括如下步骤：1)将α‑半乳糖苷酶基因与带有a‑凝集素基因的pYD1表达载体连接，构建重组质粒；2)将重组质粒转化至酿酒酵母中，获得含重组质粒的酿酒酵母工程菌株；3)将含重组质粒的酿酒酵母工程菌株置于含葡萄糖的YNB‑CAA培养基中，培养至菌体OD600达到2.9‑3.0时，回收菌体；4)将步骤3)回收的菌体以2.5％的接种量接种于含半乳糖的YNB‑CAA培养基中，22‑26℃诱导24‑84h，离心回收菌体；5)将步骤4)回收的菌体用pH5的McIlvaine缓冲液悬浊菌体，冷冻或制成冻干粉。