[发明专利]CRISPR-Cas9靶向敲除人肠癌细胞DEAF1基因及其特异性的sgRNA在审
| 申请号： | 201810161635.8 | 申请日： | 2018-02-27 |
| 公开（公告）号： | CN108396027A | 公开（公告）日： | 2018-08-14 |
| 发明（设计）人： | 杨蕊菊;陆路;杨兴林;潘讴东 | 申请（专利权）人： | 和元生物技术（上海）股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;C12N15/867;C12N5/10;C12N15/90 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 201321 上海市浦东*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明公开了CRISPR/Cas9靶向敲除人肠癌细胞DEAF1基因及其特异性sgRNA。首先是获得特异性靶向DEAF1基因第二外显子的sgRNA，其碱基序列如SEQ ID NO.1所示；其次是构建DEAF1基因的sgRNA到慢病毒载体系统，该系统含有Cas9蛋白；最后将含有该sgRNA的CRISPR/Cas9慢病毒感染人肠癌HT‑29细胞，获得DEAF1蛋白表达水平显著降低的细胞株。本发明具有操作步骤简单、sgRNA靶向性好、且对DEAF1基因切割效率高；此外，所构建的CRISPR/Cas9慢病毒系统具有敲除效率高的优势，并能特异性敲除DEAF1基因，得到敲除DEAF1基因的人肠癌细胞，从而为进一步研究肠癌细胞中DEAF1的作用机制提供强有力的工具。 | ||
| 搜索关键词： | 敲除 基因 肠癌细胞 靶向 构建 慢病毒载体系统 蛋白表达水平 慢病毒感染 特异性靶向 碱基序列 切割效率 作用机制 肠癌 靶向性 慢病毒 外显子 细胞株 蛋白 细胞 研究 | ||
【主权项】：
1.一种CRISPR/Cas9靶向敲除人肠癌细胞DEAF1基因及其特异性的sgRNA，其特征在于，首先设计获得特异性靶向DEAF1基因第二外显子的sgRNA；其次构建DEAF1基因的sgRNA到慢病毒载体系统；然后将此慢病毒载体系统感染人肠癌HT‑29细胞，得到的DEAF1基因敲除细胞株。
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