[发明专利]一种八月瓜茎段愈伤组织诱导培养方法

摘要

一种八月瓜茎段愈伤组织诱导培养方法，包括外植体抗褐化、消毒、腋芽诱导培养、愈伤组织诱导培养和继代增殖培养等技术环节，方法是以刚萌发7～15天的带腋芽幼嫩茎段为外植体，用抗氧化剂维生素C浸泡、再用高锰酸钾水溶液浸泡消毒的外植体改良消毒处理方式，来显著降低外植体的褐化率和污染率，使外植体初诱导接种成活率达90%。通过在1/2MS培养基中添加1.5g.L‑1活性炭和2.0 g.L‑1聚乙烯吡咯烷酮，结合不同阶段筛选出的激素配方，能使愈伤组织诱导分化率达90%以上，能同时继代增殖培养愈伤组织和丛生芽，增殖系数3.0以上。该方法可为利用愈伤组织培养开展新品种诱变培育和良种快速育苗利用提供技术参考。

主权项

1.一种八月瓜茎段愈伤组织诱导培养方法，其特征在于包括以下步骤：(1)外植体消毒：采集刚萌发7～15d的八月瓜新梢，去掉叶片，取带腋芽茎段做外植体；冲洗干净后，用5000mg.L‑1维生素C蒸馏水溶液浸泡50min，然后用3000mg.L‑1高锰酸钾蒸馏水溶液浸泡30min，用蒸馏水冲洗3～5次，再用1000mg.L‑1氯化汞水溶液消毒10min，蒸馏水冲洗5次；(2)植物细胞组织培养各阶段的基本培养基均为：1/2MS+12g.L‑1琼脂+30g.L‑1蔗糖+1.5g.L‑1活性炭+2.0g.L‑1聚乙烯吡咯烷酮，pH值6.5；各阶段培养条件为：温度24℃～26℃，光照为1500～2000Lux，光照时间为12～14h/d；(3)腋芽初诱导培养：将消毒后的外植体按生长极性竖立接种在基本培养基+0.8mg.L‑16‑糠氨基嘌呤+0.005mg.L‑1萘乙酸的腋芽初诱导培养基上；(4)愈伤组织诱导培养：将初诱导培养产生的腋芽剪切成长度0.5cm的小段后接种于基本培养基+0.5mg.L‑16‑卞氨基嘌呤+0.1mg.L‑12,4‑二氯苯氧乙酸+0.1mg.L‑1～0.05mg.L‑1萘乙酸的愈伤组织培养基上，可产生直径1.0cm的绿色疏松愈伤组织；(5)继代增殖培养：用镊子轻轻将愈伤组织分成直径0.5cm的小块后接种在基本培养基+2.5mg.L‑1噻苯隆+0.1mg.L‑1吲哚丁酸的继代增殖培养基上，同时分化愈伤组织和丛生芽，每块直径1.5cm左右，可分化4～5个丛生芽。