[发明专利]一种冷饭团带芽嫩茎的组培育苗方法

摘要

一种冷饭团带芽嫩茎的组培育苗方法，包括外植体抗褐化、消毒处理、腋芽诱导培养、愈伤组织诱导培养、丛生芽诱导分化和生根培养技术环节。方法以刚萌发的带芽嫩茎为外植体，先后通过抗氧化剂Vc蒸馏水溶液浸泡高锰酸钾蒸馏水溶液浸泡；最后通过在初诱导、愈伤组织诱导和继代增殖培养3阶段培养基中添加孔隙度较大的珍珠岩和活性炭来吸附冷饭团嫩茎分割后产生的白色粘液及有害物质，添加PVP来抑制酚类等褐变物质的产生。采用本发明方法，可将初诱导污染率、褐化率控制在15%以下，增值系数4.0以上，诱导成活率及生根率均达85%以上。本发明首次系统报道了冷饭团组培育苗技术方案，为冷饭团良种工厂化育苗技术体系优化集成提供参考依据。

主权项

1.一种冷饭团带芽嫩茎的组培育苗方法，其特征在于包括以下步骤：(1)外植体消毒：采集刚萌发5～10天的冷饭团新梢，去掉叶片，取带芽嫩茎做外植体；冲洗干净后，用3500mg.L‑1维生素C蒸馏水溶液浸泡50min，然后用3000mg.L‑1高锰酸钾蒸馏水溶液浸泡30min，用蒸馏水冲洗3～5次，再用1000mg.L‑1氯化汞水溶液常规消毒10min，蒸馏水冲洗5次；(2)植物细胞组织培养各阶段的基本培养基均为：1/2MS+12g.L‑1琼脂+30g.L‑1蔗糖，pH值5.0；各阶段培养条件为：温度24℃～26℃，光照为1500～2000Lux，光照时间为12～14h/d；(3)腋芽初诱导培养：将消毒后的外植体按生长极性竖立接种，诱导腋芽萌发；培养25d后，萌发1个长1.5cm的单芽；培养基配方：基本培养基+3.0g.L‑1珍珠岩+2.0g.L‑1活性炭+1.5g.L‑1聚乙烯吡咯烷酮+1.0mg.L‑1噻苯隆+0.01mg.L‑1萘乙酸；(4)愈伤组织诱导培养：将初诱导培养产生的腋芽剪切成长度0.5cm的小段后接种，诱导愈伤组织分化；培养40d后，产生直径1.0cm的绿色疏松愈伤组织；培养基配方：基本培养基+3.0g.L‑1珍珠岩+2.0g.L‑1活性炭+1.5g.L‑1聚乙烯吡咯烷酮+0.8mg.L‑1噻苯隆+0.1mg.L‑12,4‑二氯苯氧乙酸+0.1mg.L‑1萘乙酸；(5)继代增殖培养：用镊子轻轻将愈伤组织分成直径0.5cm的小块后接种，诱导丛生芽分化；培养35d后，愈伤组织膨大生长，每块直径1.5cm，同时分化出愈伤组织和丛生芽，每块分化4‑5个芽；培养基配方：基本培养基+3.0g.L‑1珍珠岩+2.0g.L‑1活性炭+1.5g.L‑1聚乙烯吡咯烷酮+2.5mg.L‑1噻苯隆+0.1mg.L‑1吲哚丁酸。(6)生根诱导培养：将继代增殖形成的丛生芽剪切单芽后接种于的生根培养基上，诱导生根；培养25d后，20％开始生根，50d后，85％产生根系，每株2～5根，根长0.5～3.0cm；培养基配方：基本培养基+500mg.L‑1蛋白胨+0.3mg.L‑16‑卞氨基嘌呤+1.0mg.L‑1吲哚丁酸。