[发明专利]一种miR-3880靶基因筛选方法

摘要

本发明公开了一种miR‑3880靶基因筛选的方法，以山羊基因组DNA为模板，在Taq DNA聚合酶、缓冲环境、Mg2+、dNTPs存在的情况下，利用引物OGR1在PCR条件下进行扩增，确定得到的PCR产物为OGR1基因3'UTR区的序列；然后构建双荧光素酶报告系统，检测荧光素酶活性，初步鉴定miR‑3880的靶基因；采用RT‑qPCR法检测miR‑3880模拟物对OGR1基因在mRNA水平的影响；再采用Western blot法检测miR‑3880模拟物对OGR1基因在蛋白水平的影响。明确了OGR1 3'UTR区存在与miR‑3880的结合位点，验证了miR‑3880与靶基因OGR1的靶向调控关系，miR‑3880可以抑制OGR1基因在mRNA和蛋白水平上的表达，进一步确认OGR1是miR‑3880的靶基因。为研究miR‑3880对奶山羊乳腺发育和泌乳功能的影响奠定了基础。

主权项

1.一种miR‑3880靶基因筛选方法，其特征在于，按下列步骤进行：1)以山羊基因组DNA为模板，在Taq DNA聚合酶、缓冲环境、Mg2+、dNTPs存在的情况下，利用引物OGR1在PCR条件下进行扩增，确定得到的PCR产物为OGR1基因3'UTR区的序列；2)构建双荧光素酶报告系统，检测荧光素酶活性，初步鉴定miR‑3880的靶基因；3)采用RT‑qPCR法检测miR‑3880模拟物对OGR1基因在mRNA水平的影响；4)采用Western blot法检测miR‑3880模拟物对OGR1基因在蛋白水平的影响。