[发明专利]一种纳米颗粒表面吸附蛋白配体状态的测定方法

摘要

本发明涉及一种纳米颗粒表面吸附蛋白配体状态的测定方法，所述方法通过计算出标准比对值D0，然后通过将待测表面吸附蛋白配体的纳米颗粒分散液的待测比对值D1与之比较，判定纳米颗粒表面吸附蛋白配体状态。本发明通过测定了包覆有配体的纳米颗粒表面配体个数，获得了配体的存在状态，为研究纳米颗粒与蛋白的相互作用，以及研究吸附蛋白的生物活性起到了关键作用；测试方法简单，重复性好，偏差小。

主权项

1.一种纳米颗粒表面吸附蛋白配体状态的测定方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：(1)配制浓度为1011个/L的裸纳米颗粒分散液，并在梯度溶液中，采用CPS离心粒度仪测定裸纳米颗粒的stokes粒径dc；(2)配制系列的至少12个标准蛋白配体分散液，并记录每个标准蛋白配体分散液的摩尔浓度C；(3)将裸纳米颗粒分散液分别与每个标准蛋白配体分散液混合，制备系列标准表面吸附蛋白配体的纳米颗粒分散液；(4)对于系列标准表面吸附蛋白配体的纳米颗粒分散液，测量其中每个表面吸附蛋白配体的纳米颗粒分散液的纳米颗粒表面吸附蛋白配体的平均个数N，测定方法为：在与步骤(1)相同的梯度溶液中，采用CPS离心粒度仪测定所述标准表面吸附蛋白配体的纳米颗粒的表观stokes粒径d；根据式(I)计算配体层的厚度Δl：其中，d是标准表面吸附蛋白配体的纳米颗粒的表观stokes粒径；dc是裸纳米颗粒的stokes粒径；Δl是配体层的厚度；ρs是裸纳米颗粒的材质密度；ρp为梯度溶液的平均密度；根据式(II)计算蛋白配体的个数N：其中，Rc是标准表面吸附蛋白配体的纳米颗粒的总体粒径，其中Rc＝dc+2Δl；dc是裸纳米裸颗粒的stokes粒径；Mr是配体的分子量，ρ是配体蛋白的密度，NA是阿伏伽德罗常数；(5)用纳米颗粒的理论表面积除以蛋白配体的平铺横截面积为蛋白分子全部为平铺状态吸附在纳米颗粒表面时的理论个数，记为A；绘制系列蛋白配体分散液的摩尔浓度的对数值与蛋白配体的个数N的关系曲线，并记录曲线与y＝A的交叉点的横坐标，并换算为蛋白配体分散液的浓度，记为B0；根据式(III)得到标准比对值D0：D0＝B0×NA/1011              式(III)；其中，NA是阿伏伽德罗常数，D0为标准比对值，B0是蛋白配体分散液的浓度，mol/L；(6)判定步骤：待判定表面吸附蛋白配体的纳米颗粒分散液中，蛋白配体的摩尔浓度为B’1，纳米颗粒的个数浓度为B’2，根据式(IV)计算待测比对值D1：D1＝B’1×NA/B’2             式(IV)；其中，NA是阿伏伽德罗常数，D1为待测比对值，B’1是配制待判定表面吸附蛋白配体的纳米颗粒分散液使用的蛋白配体分散液的摩尔浓度，mol/L；B’2是配制待判定表面吸附蛋白配体的纳米颗粒分散液使用的纳米颗粒分散液的个数浓度，个/L；当D1大于D0时，纳米颗粒表面吸附蛋白配体状态为平铺和垂直同时存在；当D1小于D0时，纳米颗粒表面吸附蛋白配体状态为平铺。